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细叶百合LpWRKY20基因的克隆与烟草遗传转化及功能探究

一、绪论

1.1百合研究进展

1.1.1百合休眠解除研究进展

百合作为多年生球根花卉，在其生长发育过程中，休眠是一个重要的生理现象。百合休眠指的是在特定环境条件下，百合种球或植株暂停生长活动，代谢水平显著降低，以度过不良环境时期的一种生理状态。这种休眠现象对百合的生存和繁衍至关重要，它使得百合能够适应季节变化和环境波动，确保在适宜的条件下生长和繁殖。

百合休眠可分为自然休眠和被迫休眠。自然休眠是由百合自身的遗传特性和生理节律决定的，即使外界环境条件适宜生长，百合也会进入休眠状态，以完成内部的生理转化和物质积累。被迫休眠则是由于外界环境条件如温度、光照、水分等不适宜，导致百合生长受阻而进入的休眠状态。一旦外界环境条件恢复适宜，百合便有可能解除被迫休眠，重新恢复生长。

在自然休眠过程中，百合种球内部发生一系列复杂的生理生化变化，如激素水平的调整、淀粉等贮藏物质的转化以及呼吸代谢途径的改变等。这些变化为百合种球在休眠结束后能够迅速恢复生长和发育奠定了基础。研究表明，在百合自然休眠期间，脱落酸（ABA）含量升高，它抑制细胞的分裂和伸长，从而维持百合的休眠状态；而赤霉素（GA）、生长素（IAA）等促进生长的激素含量则相对较低。随着休眠的解除，ABA含量逐渐下降，GA、IAA等激素含量上升，打破休眠的抑制信号，启动生长发育相关的生理过程。

目前，打破百合休眠的方法主要有低温处理、化学药剂处理以及二者结合的处理方式。低温处理是最为常用且有效的方法之一，通过将百合种球置于低温环境下（一般为2-9°C），处理4到16周不等，具体时间因百合品种而异。低温处理能够促进种球内部激素平衡的调整，降低ABA含量，增加GA等促进生长激素的合成和活性，从而打破休眠。例如，将百合种球放置在5°C的冷库中冷藏8周，可有效打破许多百合品种的休眠，显著提高种球的发芽率和生长势。

化学药剂处理方面，常用的药剂包括赤霉素（GA3）、细胞分裂素（如6-BA）等。用100mg/LGA3溶液浸泡百合鳞茎，能打破其休眠。为避免发根阻碍，可先将鳞茎倒置浸泡一半，再恢复正常位置处理。GA3能够促进细胞的伸长和分裂，加速种球内部生理生化过程的转变，从而打破休眠。将百合种球浸泡在一定浓度的6-BA溶液中，也能在一定程度上打破休眠，促进种球萌发。但化学药剂处理时，需严格控制药剂浓度和处理时间，否则可能对百合种球造成伤害，影响后续生长发育。

一些研究还探索了将低温处理与化学药剂处理相结合的方法，以进一步提高百合休眠解除的效果和效率。先对百合种球进行短时间的低温预处理，再用低浓度的GA3溶液浸泡处理，可在缩短休眠解除时间的同时，提高种球发芽的整齐度和幼苗的健壮程度。

1.1.2百合抗性研究

百合在生长过程中常常面临各种逆境胁迫，包括干旱、盐碱、低温、高温等非生物胁迫以及病虫害等生物胁迫。这些逆境胁迫严重影响百合的生长发育、产量和品质，因此，对百合抗性的研究具有重要的理论和实践意义。

在干旱胁迫下，百合植株会发生一系列生理生化变化来适应逆境。干旱胁迫会导致百合叶片相对含水量下降，叶片气孔关闭，蒸腾作用减弱，以减少水分散失。同时，百合体内的渗透调节物质如脯氨酸、可溶性糖等含量增加，这些物质能够降低细胞的渗透势，维持细胞的膨压，保证细胞正常的生理功能。研究表明，在干旱胁迫下，龙牙百合叶片的脯氨酸含量显著增加，随着干旱胁迫时间的延长，脯氨酸含量持续上升，从而提高了百合细胞的保水能力，增强了其抗旱性。一些百合品种还会通过调节抗氧化酶系统的活性来应对干旱胁迫，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）等抗氧化酶能够清除体内过多的活性氧，减轻氧化损伤，维持细胞的正常代谢和功能。

对于盐碱胁迫，百合的耐盐机制主要包括离子平衡调节和渗透调节。在盐碱环境中，百合会通过离子转运蛋白将过多的Na+排出细胞外，或区隔化到液泡中，以维持细胞内的离子平衡，减少Na+对细胞的毒害作用。百合还会积累可溶性糖、甜菜碱等渗透调节物质，调节细胞的渗透势，保持水分吸收和细胞膨压。研究发现，盐胁迫下，百合两个品种的叶绿体和线粒体超微结构会发生变化，耐盐性较强的品种能够更好地维持细胞器的结构和功能稳定，通过调节离子平衡和渗透调节物质含量来适应盐碱环境。

低温胁迫对百合的影响也较为显著，尤其是在冬季或早春季节，低温可能导致百合生长受阻、冻害甚至死亡。百合的抗寒机制涉及多个方面，细胞膜的稳定性是抗寒的重要基础。低温胁迫下，百合细胞膜的脂肪酸组成会发生变化，不饱和脂肪酸含量增加，使细胞膜在低温下保持较好的流动性和完整性，减少细胞损伤。百合还会积累脯氨酸、可溶性糖等抗寒物质，这些物质