微流控芯片上细胞电融合过程的控制参数优化研究.pdfVIP

摘要

细胞融合在基因表达调控机制研究、细胞重编程研究、癌症疫苗研发等领域

具有重要作用。基于微流控的细胞电融合方法因其易于操作、对细胞伤害小、融

合率高以及能够精确控制细胞与电场等优点而备受关注。然而，现有微流控细胞

电融合研究缺乏合适的仿真分析模型以指导微结构及相关实验参数的设计与优化，

且细胞长时间处于电场环境和低渗缓冲液中，其活力明显下降，因此融合率普遍

低于50%，有待进一步提高。基于此，本文构建了一种更为完善的细胞电融合仿

真模型，将该模型应用于电融合微流控芯片的设计及相关实验参数的优化，提出

了一种高效细胞电融合方案。

在微流控细胞电融合研究中，首先，对现有模型进行优化与完善，综合静息

电位和细胞-细胞接触面等因素，构建了一种能够预测配对细胞电穿孔位置、数量

与尺寸分布的三维电融合仿真模型，并根据前期电穿孔及电融合实验结果对模型

进行验证，以提高模型的可靠性。其次，针对细胞长时间处于电场中活力下降的

问题，采用流体控制进行细胞捕获与配对。在此基础上，根据流体动力阻力捕获

理论，流体捕获微结构模型预测的细胞捕获与配对情况，以及电融合微结构模型

预测的细胞电融合过程中的电穿孔情况，设计并制作了由限位捕获腔阵列微通道

层和叉指微电极层所组成的电融合微流控芯片。基于上述芯片，待完成细胞配对

后，提出通入低渗电融合缓冲液置换培养基（原位低渗置换）的实验方法，以实

现细胞间紧密接触，同时减少细胞处于低渗缓冲液中的时间，保持细胞活性。

通过模型仿真结合实验，进一步探究了进样速度和脉宽等参数对细胞活性、

细胞配对及电融合的影响。研究结果确定了在优化的芯片结构中，较优的进样速

度范围为0.4~0.5μL/min，在该进样速度范围内，细胞活性良好，配对率达到了

89.67%10.02%；并确定了融合电信号脉宽范围为10~20μs，与50μs的脉宽相

比，在该脉宽范围内，细胞融合率提升了大约20%。最后，为验证芯片的有效性，

在优化的参数条件下，基于小鼠骨髓瘤（SP2/0）细胞和人类髓性白血病（K562）

细胞开展了电融合实验研究，融合率分别达到88.33%0.58%和81.33%3.51%。

本文的仿真研究结果与实验结果具有较好的一致性，说明所构建的仿真模型

对于芯片结构设计和实验操作有很好的指导意义，实验结果也初步证实了本文设

计的限位捕获腔阵列微流控芯片及实验方法对活细胞具有较好的融合效果。

关键词：电融合；微流控；电穿孔；仿真

Abstract

Cellfusionplaysaveryimportantroleinmanyresearchareassuchasgene

expressionregulation,cellreprogrammingandcancervaccinedevelopment.

Microfluidic-basedcellelectrofusionmethodshaveattractedmuchattentionduetotheir

advantagesofeasytooperate,causingminimalcelldamage,highfusionrates,aswellas

precisecontrolovercellsandelectricfields.However,thefusionratesofexisting

microfluidiccellelectrofusionstudiesaregenerallybelow50%,whichneedstobefurther

improved.Thisisduetothelackofasuitablesimulationmodeltoguidethedesignand

optimizationofmicrostructuresandrelatedexperimentalparameters,aswellasa

significantdecreaseincellviabilitywhenc