酶学理论基础.pptVIP

随着底物浓度的增高，反应速度不再成正比例加速，反应为混合级反应。[S]VVmax第62页，共114页，星期日，2025年，2月5日当底物浓度高达一定程度，反应速度不再增加，达最大速度，反应为零级反应，说明酶已经被底物所饱和。[S]VVmax第63页，共114页，星期日，2025年，2月5日1.米氏方程1913年，米彻利斯(Michaelis)和曼吞（Menton)在前人研究的基础上，推导出著名的米氏方程：v——反应速度S——底物浓度vm——最大反应速度Km——米氏常数，为酶催化反应速度等于最大反应速度一半时的底物浓度。第64页，共114页，星期日，2025年，2月5日推导过程E+Sk1k2k3ESE+P基本假设：1）E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速度取决于慢反应,即V＝k3[ES]；2）S的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变即[S]＝[St]；3）ES的生成速度与分解速度相等，即[ES]恒定。k1([Et]－[ES])[S]＝k2[ES]+k3[ES]第65页，共114页，星期日，2025年，2月5日k1([Et]－[ES])[S]＝k2[ES]+k3[ES]k2+k3＝Km（米氏常数）k1令：则(1)变为:([Et]－[ES])[S]＝Km[ES](1)＝([Et]－[ES])[S]k2+k3[ES]k1整理得：推导过程第66页，共114页，星期日，2025年，2月5日★当底物浓度很高，将酶的活性中心全部饱和时，即[Et]＝[ES]，反应达最大速度Vmax＝K3[ES]＝K3[Et](4)[ES]＝───[Et][S]Km+[S](2)整理得:将(4)代入(3)得米氏方程式：Vmax[S]Km+[S]V＝────将(3)代入(1)得k3[Et][S]Km+[S](3)V＝────第67页，共114页，星期日，2025年，2月5日当反应速度为最大反应速度一半时,★分析与讨论：1）Km值Km＝[S]∴Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。2＝Km+[S]VmaxVmax[S]VmaxV[S]KmVmax/2第68页，共114页，星期日，2025年，2月5日2）Km与Vmax的意义①Km是酶的特征性常数之一，其大小只与酶的性质有关，而与酶的种类无关；Km值作为常数只对一定的底物、pH、温度和离子强度等条件而改变，因此对某一酶促反应而言，在一定条件下都有特定的Km值，可以鉴别酶；②1/Km可近似表示酶对底物的亲和力大小，1/Km愈大，表明亲和力越大；③Km值可以帮助推断某一代谢反应的方向与途径：第69页，共114页，星期日，2025年，2月5日思考题1）酶1、2、3分别催化A→→B→→C→→D三步反应，相对应底物A、B、C的Km值分别为10-2、10-3、10-4mol/L，而细胞内A、B、C的浓度均接近10-4mol/L，可以推知限速反应是哪一步？A→→B2）丙酮酸在体内至少可以被乳酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、丙酮酸脱羧酶等3种酶催化分别形成乳酸、乙酰辅酶A和乙醛，它们的Km值分别为1.7×10-5、1.3×10-3、1.0×10-3mol/L，可以推知在丙酮酸浓度较低时容易走哪条途径？乳酸脱氢酶催化丙酮酸形成乳酸?第70页，共114页，星期日，2025年，2月5日3）Ｋm值与Ｖmax值的测定1）双倒数作图法(doublereciprocalplot)，又称为林-贝氏(Lineweaver-Burk)作图法Vmax[S]Km+[S]V=（林－贝氏方程）+1/V=KmVmax1/Vmax1/[S]两边同取倒数第71页，共114页，星期日，2025年，2月5日酶动力学的双倒数图线第72页，共114页，星期日，2025年，2月5日2）Eadie—Hofstee作图法[S][S]/V-KmKm/Vm在林－贝氏方程基础上，两边同乘[S][S]/V=Km/Vmax+[S]/Vmax第73页，共114页，星期