人线粒体DNA聚合酶γ表达纯化及活性分析.pdfVIP

4012Vol.40No.12

第卷第期长春中医药大学学报

202412JournalofChangchunUniversityofChineseMedicineDec.2024

年月

DOI:10.13463/ki.cczyy.2024.12.010

DNAγ

人线粒体聚合酶表达纯化及活性分析

12111121*

,

盛彦敏，肖丽娟，杨亚兰，刘禹佳，齐英，沈鑫，李庆奇

1.5109002.130032

（广州华夏职业学院，广州；长春师范大学，长春）

DNAγPolγ

摘要：目的表达纯化人线粒体聚合酶（），并分析其活性，以应用于核苷（酸）类抗病毒药的毒副作用

PCMV-SPORT6-POLGPCRDNAγPOLG

检测与筛选。方法以质粒为模板，扩增人线粒体聚合酶基因（），并克隆

至pPIC9K载体中，构建高效表达载体pPIC9K-POLG，重组表达载体经酶切线性化后采用电击转化法转化GS115毕赤酵

母细胞，30℃1%甲醇诱导表达。表达蛋白经SDS和WesternBlot鉴定和纯化，并利用掺入法对比商品Polγ酶分

析其活性。结果PCR扩增的POLG基因大小约3.7kb，测序分析结果与GenBank中公布的序列一致，表达的Polγ重

组蛋白为可溶性蛋白，其分子量约为138KD，重组Polγ酶具有比商品酶略低的活性。结论构建了重组高效表达载体

pPIC9K-POLGPolγPolγ8UµL-1

，成功在酵母细胞中表达了重组酶，建立了酶的体外真核表达体系。重组酶活力约为·，

可应用于核苷（酸）类抗病毒药物的筛选和检测。

DNAγGS115

关键词：人线粒体聚合酶；毕赤酵母；表达纯化；活性分析

中图分类号：R392文献标志码：A文章编号：2095-6258(2024)12-1342-05

Expression,purification,andactivityanalysisofhumanmitochondrialDNA

polymerasegamma

1,211