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成血管诱导微环境下正常与深龋牙髓干细胞特性差异及机制探究

一、引言

1.1研究背景与意义

牙齿作为人体重要的咀嚼器官，对维持正常的口腔功能和生活质量起着关键作用。然而，由于龋病、牙髓炎、牙周炎等多种口腔疾病的影响，牙齿缺失或损伤的情况较为常见，严重困扰着患者的日常生活。传统的牙齿修复方法，如烤瓷牙、种植牙等，虽在一定程度上解决了牙齿缺失的问题，但仍存在诸多局限性，如对邻牙的损伤、种植手术的风险以及高昂的费用等。因此，寻找一种更加理想的牙齿修复和再生方法，成为口腔医学领域亟待解决的重要课题。

牙髓干细胞（DentalPulpStemCells,DPSCs）的发现为牙组织工程的发展带来了新的契机。牙髓干细胞是一种存在于牙髓组织中的成体干细胞，具有自我更新和多向分化的潜能。在适宜的条件下，牙髓干细胞可以分化为成牙本质细胞、成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞等多种细胞类型，展现出在牙齿再生、牙髓修复以及其他组织工程领域的巨大应用前景。例如，将牙髓干细胞与支架材料复合后植入体内，有望实现牙髓-牙本质复合体的再生，为治疗牙髓病和根尖周病提供了新的策略；在骨组织工程中，牙髓干细胞也可分化为成骨细胞，促进骨缺损的修复。

目前，大多数关于牙髓干细胞的研究主要聚焦于从健康牙髓组织中分离培养出的牙髓干细胞。然而，在实际临床中，更多面临的是患有龋病等口腔疾病的患者，其牙髓组织处于非健康状态。研究表明，从深龋牙髓组织分离培养出的牙髓干细胞与正常牙髓干细胞相比，具有更强的增殖以及矿化能力。这一发现提示我们，从非健康状态的牙髓组织分离出的牙髓干细胞同样可能在牙组织工程中发挥重要作用。

血管生成是组织修复和再生的基础，对于牙髓组织而言，其血运主要依赖于通过根尖孔的血管，且缺乏有效的侧枝循环。因此，牙髓内的血管再生对于牙髓组织的修复和再生至关重要。在牙齿发育和修复过程中，血管不仅为牙髓组织提供必要的营养物质和氧气，还参与了细胞的增殖、分化和迁移等过程，对维持牙髓组织的正常生理功能起着不可或缺的作用。然而，目前关于深龋牙髓干细胞在成血管方面的研究报道尚属空白。深入探究正常与深龋牙髓干细胞在成血管诱导微环境中的成血管及矿化特性，对于揭示牙髓干细胞在牙组织工程中的作用机制具有重要的理论意义。通过比较两者的差异，可以进一步了解牙髓干细胞在不同生理病理状态下的生物学行为，为优化牙髓干细胞的应用提供理论依据。这一研究对于开发基于牙髓干细胞的新型牙组织工程治疗策略具有潜在的应用价值。如果能够明确深龋牙髓干细胞在成血管和矿化方面的优势，将为临床治疗牙髓病、根尖周病以及牙齿再生提供新的细胞来源和治疗思路，有望改善患者的治疗效果和生活质量。

1.2国内外研究现状

在牙髓干细胞的研究领域，国内外学者已取得了丰硕的成果。自2000年Gronthos等首次从人牙髓组织中分离出牙髓干细胞以来，众多研究围绕其生物学特性、分离培养方法、分化潜能等方面展开。

在正常牙髓干细胞的研究方面，学者们对其形态、表面标志物、多向分化能力等有了较为深入的了解。正常牙髓干细胞通常呈长梭形，具有典型的间充质干细胞特征，高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105等间充质干细胞表面标记分子，低表达或不表达造血干细胞表面标记分子如CD34、CD45等。在体外培养条件下，正常牙髓干细胞能够向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等多个方向分化，展现出良好的多向分化潜能。例如，在成骨诱导培养基的作用下，正常牙髓干细胞可表达成骨相关基因和蛋白，如骨钙素（OCN）、骨桥蛋白（OPN）、Runx2等，并形成矿化结节，表明其具有向成骨细胞分化的能力；在脂肪诱导培养基中，细胞内可出现脂滴，同时脂肪细胞特异性基因如过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的表达上调，证明其可分化为脂肪细胞。

对于深龋牙髓干细胞，近年来也逐渐受到关注。已有研究表明，深龋牙髓干细胞在生物学特性上与正常牙髓干细胞存在一定差异。深龋牙髓干细胞具有更强的增殖能力和克隆形成能力。麻丹丹等人通过实验比较了正常与深龋牙髓干细胞的增殖能力，发现深龋牙髓干细胞在相同培养条件下的细胞增殖速度明显快于正常牙髓干细胞。在矿化能力方面，深龋牙髓干细胞在矿化诱导后形成矿化结节的能力也强于正常牙髓干细胞，同时碱性磷酸酶活性更高，相关矿化基因和蛋白的表达量也显著增加。

在成血管特性的研究方面，目前主要集中在正常牙髓干细胞。研究发现，正常牙髓干细胞在添加血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）等成分的低血清培养基中培养一段时间后，可以表达内皮细胞标志物，如血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）、CD31和血浆血管性血友病因子（vWF）等，同时具有在基质胶上形成管状结构的能力，表明其可向血管内皮细胞分化。在体内实验中，正常牙髓干