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抗烟草赤星病放线菌的复筛及其活性代谢产物研究

一、研究背景与意义

（一）烟草赤星病的危害与防治现状

烟草赤星病作为我国烟草生产进程中极为关键的一种病害，对烟叶的产量与品质产生着严重的负面影响。在环境条件适宜发病时，短时间内就能迅速扩散，引发大规模流行，致使烟农承受巨大的经济损失。从发病症状来看，该病害通常起始于烟株下部叶片，初期呈现为褐色小斑点，随后逐渐扩展成直径1-2cm的深褐色至赤褐色病斑，形状多为圆形或不规则圆形，病斑周围伴有淡黄色晕圈，且具有多重同心轮纹，严重时病斑相互连接，导致叶片枯焦破碎。据中国烟叶购销公司统计数据显示，2005年，烟草赤星病在全国15个省市广泛发生，发病面积高达81.5万hm2，仅次于病毒病，位居第二，产量损失多达1370.918万kg，产值损失更是达到9138.615万元。除了影响产量和产值，赤星病还会改变烟叶的化学成分，使烟碱与还原糖含量降低，蛋白质及总氯含量提高，随着发病程度的加重，这些指标的变化幅度也会进一步加大，进而严重影响烟叶的评吸质量。

目前，在烟草赤星病的防治方面，化学防治仍然占据着主导地位，其中菌核净是较为常用的一种农药。相关研究表明，40%菌核净可湿性粉剂在防治烟草赤星病时，不同的用药次数会产生不同的防治效果。例如，用药一次的平均防治效果可达68.77%，用药二次的平均防治效果为85.93%，用药三次的平均防治效果则高达90.93%。然而，长期大量使用化学农药，如菌核净，也带来了诸多弊端。一方面，容易导致病菌产生抗药性，使得农药的防治效果逐渐下降；另一方面，农药的高残留问题严重，会对环境造成污染，同时也可能对人体健康构成潜在威胁。因此，寻找一种更加环保、安全且有效的防治方法迫在眉睫，生物防治因其具有环境友好性等显著优势，成为了烟草赤星病防治领域的重要发展方向。

放线菌作为一类在微生物界具有重要地位的原核生物，能够产生多种结构多样、作用机制独特的抗生素。在已知的抗生素中，约有66%是由放线菌产生的，其中链霉菌更是占据了55%。这些抗生素在植物真菌病害的防治中展现出了巨大的潜力，像杀稻瘟菌素S、放线菌酮等知名抗生素，均来源于放线菌，它们为新型生物农药的研发提供了丰富的资源和广阔的思路。

（二）放线菌在生物防治中的优势

放线菌之所以在生物防治领域备受关注，主要归因于其能够产生种类繁多、结构复杂的抗生素。这些抗生素不仅结构多样，而且作用机制独特，能够通过不同的方式抑制或杀灭病原菌。在目前已知的抗生素中，放线菌产生的抗生素占比高达66%，这一数据充分彰显了放线菌在抗生素生产领域的重要地位。而在放线菌中，链霉菌又是产生抗生素的主要类群，其所产生的抗生素占比达到了55%。众多临床常用的抗生素，如链霉素、庆大霉素、卡那霉素、四环素、土霉素、金霉素等，以及应用于农业领域的井冈霉素、庆丰霉素等，均是由放线菌中的链霉菌产生的。

我国地域辽阔，生态环境复杂多样，拥有着极为丰富的放线菌资源。尤其是云南等地，凭借其独特的地理位置、气候条件和生态环境，孕育了大量的放线菌，其放线菌资源约占世界报道种属的50%。丰富的放线菌资源为相关研究提供了得天独厚的条件。在前期的研究工作中，科研人员从10000余株放线菌中，通过精心筛选，初筛得到了278株对烟草赤星病具有较强抗性的菌株。这些菌株的获得，为后续进一步开展复筛工作以及对其代谢产物的深入研究奠定了坚实的基础，使得我们有望从中筛选出更加高效、稳定的抗烟草赤星病放线菌菌株，并对其活性代谢产物进行研究和开发，为烟草赤星病的生物防治提供新的途径和方法。

二、抗烟草赤星病放线菌复筛方法

（一）复筛菌株的初步筛选

在前期的研究工作中，科研人员从数量众多的放线菌中进行了初筛，总共获得了278株放线菌。为了进一步筛选出对烟草赤星病具有更强拮抗活性的菌株，本研究依据一系列关键指标展开了筛选工作。首先是抑菌圈直径，这是衡量菌株拮抗能力的一个直观且重要的指标，较大的抑菌圈直径通常意味着该菌株能够更有效地抑制烟草赤星病菌的生长；其次是发酵液抑菌率，它反映了菌株发酵液对病菌的抑制程度，抑菌率越高，说明发酵液的抑菌效果越好。

通过对这278株放线菌在这两个关键指标上的综合评估，最终筛选出了6株表现突出的菌株。这6株菌株在抑菌圈直径和发酵液抑菌率方面均展现出了明显的优势，针对烟草赤星病呈现出较强的拮抗活性，因此被确定为复筛研究的对象，为后续更加深入的研究奠定了基础。

（二）多层次复筛模型的建立

室内离体筛选：采用多种方法对筛选出的6株放线菌进行室内离体筛选，包括平板对峙法、抑菌率测定及发酵液扩散法。平板对峙法是将复筛菌株与烟草赤星病菌在平板培养基上进行对峙培养，通过观察两者之间形成的抑菌圈大小，直观地判断复