核酸化学理化性质.pptVIP

Tm：变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围内，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(meltingtemperature,Tm)。其大小与G+C含量成正比。目录第26页，共45页，星期日，2025年，2月5日①DNA的均一性均一性越高，DNA的解链温度越窄。均质DNA熔解过程发生在一个较小的温度范围内；异质DNA的熔解过程发生在一个较宽的温度范围内。Tm值可作为衡量DNA样品均一性的标准。②G-C的相对含量越多，Tm值越高。G和C的含量高，Tm值高。因而测定Tm值，可反映DNA分子中G,C含量，可通过经验公式推算Tm值或G-C含量：（G+C)%=（Tm-69.3）×2.44问：DNA的Tm值与哪些因素有关呢？第27页，共45页，星期日，2025年，2月5日③介质中的离子强度离子强度较低，DNA溶解温度较低，且溶解温度范围较宽。离子强度较高，DNA溶解温度较高，且溶解温度范围较窄。故DNA不应保存在极烯的溶液中。④pH值的影响高pH下碱基广泛去质子而丧失形成氢键的能力。⑤变性剂的影响如甲酰胺、尿素、甲醛等破坏氢键，妨碍碱基堆积，使Tm下降。第28页，共45页，星期日，2025年，2月5日由于RNA本身只有局部的双螺旋区，所以变性行为所引起的性质变化没有DNA那样明显。具体：变性曲线不那么陡，Tm值也较低。利用紫外吸收的变化，可以检测核酸变性的情况。例如，天然状态的DNA在完全变性后，紫外吸收(260nm)值增加25－40%.而RNA变性后，约增加1.1%。这种现象称为增色效应.3.RNA的变性第29页，共45页，星期日，2025年，2月5日变性后的核酸在260nm处的紫外吸收明显升高，称增色效应。核酸复性后，光吸收值又回复到原有水平（减色效应）。这是检测核酸变性的一个最简便的方法。思考：增色效应的原因？当核苷酸摩尔数相同时，A260值大小如下关系：单核苷酸单链DNA双链DNA4.增色效应的原因(P508)第30页，共45页，星期日，2025年，2月5日DNA复性的定义在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。减色效应：DNA复性时，其溶液OD260降低。热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing)。退火温度＝Tm－25℃目录(2)核酸的复性(P508,掌握)第31页，共45页，星期日，2025年，2月5日DNA复性的程度、速率与复性过程的条件有关。将热变性的DNA骤然冷却至低温时，DNA不可能复性。但是将变性的DNA缓慢冷却时，可以复性。复性影响因素：分子量越大复性越难。浓度越大，复性越容易。此外，DNA的复性也与它本身的组成和结构有关。第32页，共45页，星期日，2025年，2月5日目录目录目录第1页，共45页，星期日，2025年，2月5日第一节.核酸概述第二节.核酸的结构第三节.核酸的物理化学性质第四节.核酸的研究方法第2页，共45页，星期日，2025年，2月5日核酸的理化性质第三节目录P503第3页，共45页，星期日，2025年，2月5日一、核酸的一般性质(了解)①核酸和核苷酸既有磷酸基，又有碱性基团，所以是两性电解质，由于磷酸酸性较强常表现酸性。②晶形-DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末。③粘度—大多数DNA为线性分子，分子极不对称，长度可达几厘米，而直径只有几纳米，所以即使是极稀的DNA溶液，也有极大的粘度，RNA溶液的粘度要小得多。④溶解性：微溶于水(溶液呈酸性)，不溶于一般有机溶剂，在70%乙醇中形成沉淀==用70-95%乙醇提纯核酸。核苷酸无色、溶于水。RNA易溶于低盐(0.14MNaCl)，DNA易溶于高盐浓度(1MNaCl)。室温下，稀碱能水解RNA，而DNA稳定。稀酸可水解DNA，而浓酸可水解RNA。⑤旋光性-均很强第4页，共45页，星期日，2025年，2月5日二、核酸的水解(P503,掌握)核酸碱基与戊糖形成的N-糖苷键。磷酸基与两种糖分别形成核糖磷酸酯和脱氧核糖磷酸酯。这些糖苷键和磷酸酯键都能被酸或碱和酶水解。第5页，共45页，星期日，2025年，2月5日糖苷键和磷酸酯键都能发生酸水解，但糖苷键比磷酸酯键更易被酸水解。嘌呤碱的糖苷键比嘧啶碱的糖苷键对酸更不稳定。对酸最不稳定的是嘌呤与脱氧核糖之间的糖苷键。DNA在pH1.6于37℃对水透析即可完全除去嘌呤碱。在pH2.8于100℃加热1h，也可完全除去嘌呤碱。水解嘧啶碱需要较高的温