细胞生物学课件第三章细胞技术.pptVIP

;;;1.构成：

①照明系统

②光学放大系统

③机械装置

2.原理：经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。;现在是5页\一共有89页\编辑于星期三;现在是6页\一共有89页\编辑于星期三;3.分辨力：指分辨物体最小间隔的能力。

R=0.61λ/N．A．

其中λ为入射光线波长；N．A．为镜口率＝ｎsinα/2，n=介质折射率；α=镜口角（样品对物镜镜口的张角）。

如何提高显微镜的分辨能力？;表一、几种介质的折射率;显微镜的几个光学特点：

制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78，所用介质的折射率越接近玻璃的越好。

sinα/2的最大值必然小于1；介质为空气，镜口率一般为0.05~0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近1.5。

普通光线的波长为400~700nm，分辨力数值不会小于0.2μm，人眼的分辨力为0.2mm,因此显微镜的最大设计倍数为1000X。;（二）荧光显微镜Fluorescencemicroscope;现在是11页\一共有89页\编辑于星期三;;Fluorescenceimageofepithelialcell(上皮细胞),DNAinblueandMicrotubulesingreen;;（三）激光共聚焦扫描显微境

Laserconfocalscanningmicroscope,LCSM;LCSM;现在是17页\一共有89页\编辑于星期三;

microtubulecytoskeleton(green)andthenucleus(blue);聚光镜中央有挡光片，照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜。因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。

可观察4~200nm的微粒子，分辨率比普通显微镜高50倍。;;把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。

环形光阑（annulardiaphragm）：位于光源与聚光器之间，使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。

相位板（annularphaseplate）：物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。;现在是22页\一共有89页\编辑于星期三;用途：观察未经染色的玻片标本;（六）偏光显微镜polarizingmicroscope;（七）微分干涉差显微镜Differentialinterferencecontrastmicroscope（DIC）;物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，通常具有相差物镜，有的还具有荧光装置。

;（九）比较显微镜;;（十）当代显微镜的发展趋势;;二、电子显微镜;以电子束作光源，电磁场作透镜。电子束的波长短，并且波长与加速电压(通常50~120KV)的平方根成反比。

由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统等5部分构成。

分辨力0.2nm，放大倍数可达百万倍。

用于观察超微结构（ultrastructure），即小于0.2μm、光学显微镜下无法看清的结构，又称亚显微结构（submicroscopicstructures）。;现在是33页\一共有89页\编辑于星期三;透射电子显微镜;表二、不同光线的波长;2、制样技术;现在是37页\一共有89页\编辑于星期三;2）负染技术;3）冰冻蚀刻freeze-etching;20世纪60年代问世，用来观察标本表面结构。

分辨力为6~10nm，由于人眼的分辨力（区别荧光屏上距离最近两个光点的能力）为0.2mm，扫描电镜的有效放大倍率为0.2mm/10nm=20000X。;Scanningelectronmicroscope（SEM）;工作原理：用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与样品表面结构有关，次级电子由探测器收集，信号经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。

为了使标本表面发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属膜，重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。;扫描电子显微镜原理;;酵母细胞;（三）扫描隧道显微镜

scanningtunnelingmicroscope，STM;扫描隧道显微镜原理;;STMimage,BenzenemoleculesaccumulateatstepedgesonCu;三、显微操作技术

micromanipulationtechnique;显微操作仪;第二节生物化学与分子生物学技术;组织化学