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(2025年)仪器分析高效液相色谱试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共20分）

1.高效液相色谱（HPLC）中，以下哪种检测器无法用于梯度洗脱？

A.紫外-可见检测器（UV-VIS）

B.荧光检测器（FLD）

C.示差折光检测器（RID）

D.蒸发光散射检测器（ELSD）

2.反相HPLC中，若流动相甲醇-水比例由30:70调整为50:50，目标组分的保留时间会：

A.延长

B.缩短

C.不变

D.先延长后缩短

3.衡量色谱柱柱效的关键参数是：

A.分离度（R）

B.理论塔板数（n）

C.容量因子（k）

D.拖尾因子（T）

4.对于强极性、热不稳定的小分子化合物，最适宜的HPLC分离模式是：

A.正相色谱

B.反相色谱

C.离子交换色谱

D.尺寸排阻色谱

5.以下哪种操作会导致HPLC色谱峰展宽？

A.减小进样体积

B.降低流动相流速

C.使用粒径更小的色谱填料

D.缩短色谱柱长度

6.某样品在C18色谱柱上保留较弱，峰形尖锐但与相邻峰未完全分离，优先考虑的优化措施是：

A.提高流动相pH

B.降低流动相有机相比例

C.增加柱温

D.更换为C8色谱柱

7.检测氨基酸类化合物时，若样品无紫外吸收，最合理的前处理方法是：

A.酸化处理

B.衍生化标记（如丹磺酰氯）

C.碱化处理

D.固相萃取富集

8.以下关于UHPLC（超高效液相色谱）的描述，错误的是：

A.采用粒径2μm的色谱填料

B.操作压力显著高于传统HPLC

C.分析时间通常短于传统HPLC

D.对流动相纯度要求低于传统HPLC

9.流动相脱气不充分时，最可能出现的问题是：

A.基线漂移

B.保留时间波动

C.色谱柱寿命缩短

D.检测器信号噪声增大

10.采用外标法进行定量分析时，关键要求是：

A.内标物与待测物保留时间一致

B.标准溶液与样品溶液的色谱条件完全相同

C.流动相pH严格控制在中性

D.色谱柱温度波动不超过5℃

二、填空题（每空1分，共20分）

1.高效液相色谱的基本分离原理是基于样品中各组分在（）和（）之间的分配差异。

2.反相色谱常用的固定相是（），流动相以（）为主，极性（）固定相。

3.理论塔板数的计算公式为（），其中tR代表（），W1/2代表（）。

4.分离度R的表达式为（），当R≥（）时，可认为两峰完全分离。

5.紫外检测器的检测限通常比示差折光检测器（），但无法检测（）的物质。

6.梯度洗脱是指在分离过程中逐渐改变流动相的（）或（），适用于（）样品的分离。

7.色谱峰拖尾的常见原因包括（）、（）或（）。

8.流动相的pH值会影响（）色谱的保留行为，通常需控制在色谱柱填料的（）范围内（如C18柱一般为pH2-8）。

三、简答题（每题8分，共32分）

1.简述反相高效液相色谱（RP-HPLC）的分离机制，并说明流动相有机相比例、柱温对保留时间的影响规律。

2.比较紫外-可见检测器（UV-VIS）与蒸发光散射检测器（ELSD）的优缺点，各举1例适用的分析场景。

3.某实验室使用HPLC分析中药提取物中的生物碱类成分时，出现色谱峰展宽、分离度下降的问题，可能的原因有哪些？提出3种优化措施。

4.简述HPLC方法验证中“系统适用性试验”的主要内容及意义。

四、综合题（共28分）

题目1（14分）：某研究小组需建立HPLC方法测定人血浆中的某药物（弱酸性，pKa=4.5，紫外吸收波长254nm），要求定量检测限为0.1μg/mL。已知该药物在C18柱上保留较强，血浆中存在蛋白质及内源性杂质干扰。

（1）设计色谱条件：选择色谱柱类型、流动相组成（需考虑pH调节）、检测器及检测波长。

（2）提出样品前处理的关键步骤（至少3步），并说明每一步的目的。

（3）若初始实验中色谱峰出现严重拖尾（拖尾因子T=1.8），可能的原因是什么？给出2种解决方法。

题目2（14分）：某实验室使用C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）、流动相（甲醇-水