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青麻叶大白菜遗传多样性剖析及杂交种纯度分子鉴定技术探索

一、引言

1.1研究背景与意义

青麻叶大白菜（BrassicarapaL.ssp.pekinensisOlsson）作为蔬菜中的重要品种，拥有着极高的经济价值与营养价值。其叶球呈长筒型，叶色深绿，叶面皱缩呈核桃纹状，不仅扩大了光合面积，还因叶色浓绿、叶绿素含量高而提高了光合效率。球叶帮色呈翡翠色且帮薄，使得叶球美观，商品性好。株形直立、紧凑，外叶少，适宜密植，叶柄薄，纤维少，叶肉柔嫩，烹调易烂，被称为“开锅烂”，味道鲜美清淡，可炒、炖、煮、做菜，并可做馅料、汤料，还能加工成泡菜、酸菜、冬菜，心部嫩叶可生拌、爆腌。而且，其粗蛋白、还原糖、维生素C、氨基酸等含量均位列8个大白菜主要类型的前列，特别是氨基酸总含量和影响风味的谷氨酸含量位列第一，具有较高的营养价值。

长期的种植使得青麻叶大白菜的遗传多样性逐渐降低，品种间的差异度越来越小，导致品种生长势下降、抗病能力降低，产量和质量逐渐下滑。同时，杂种优势在农业生产中逐渐显现，对于提高种植效益和质量具有重要意义。但在实际种植中，如何快速、准确地鉴别杂交种的纯度，成为了当前亟待解决的问题。

深入了解青麻叶大白菜品种的遗传多样性状况，能够为品种保护和种质利用提供理论和数据支持。而对杂交种纯度分子鉴定的研究和方法探索，对于保证杂交种的稳定性和纯度，提高杂种利用率和种植效益，具有重要的应用意义。

1.2国内外研究现状

在青麻叶大白菜遗传多样性研究方面，国内外主要采用分子标记技术，如RAPD、ISSR、SSR、AFLP等。通过这些技术，可以分析不同青麻叶基因型之间的遗传距离和遗传多样性。一项研究通过RAPD技术对139个青麻叶品种进行分析，结果表明它们可以分为4个大类，其中第一类包括了28个品种，具有很高的遗传相似度，而第二、三、四类则包括了105个品种，显示出较高的遗传多样性。另一项研究通过ISSR技术对26个青麻叶品种进行遗传分析，结果表明各品种之间的遗传距离在0.031-0.554之间，表明青麻叶品种间存在较高的遗传多样性。利用AFLP分子标记技术对42份青麻叶大白菜品系间的遗传多样性与亲缘进行分析，5对引物组合在42份品系中共获得124条带，其中多态性条带89条，多态性比率为71.8％，计算Jaccard相似系数范围为0.469-0.977，平均为0.707，说明份品系间的遗传基础比较狭窄。

在大白菜杂交种纯度分子鉴定方面，目前PCR技术已经被广泛应用。大白菜的杂交种纯度分子鉴定主要采用PCR-RFLP技术，该技术是一种基于PCR扩增的分子生物学方法，可以利用限制性内切酶对PCR产物进行切割，从而分离杂合子和纯合子，进而判断杂交种的纯度。以大白菜F1代杂种DNA的PCR-RFLP分析为例，首先通过PCR扩增目标基因的DNA片段，然后用限制性内切酶消化产物，最后通过电泳分离出不同的DNA片段，根据其数量和大小分别判断其纯度。与传统的杂交种鉴定方法相比，PCR-RFLP技术具有操作简便、结果准确等优点。利用SRAP标记技术对‘津秋78’、‘津秋65’、‘秋绿75’、‘秋绿60’、‘津白56’5个大白菜杂交种进行种子纯度的鉴定，对82条引物进行初步筛选，结果有部分引物表现出稳定的扩增多态性，进一步从中选取多态性位点多、条带清晰的19条随机引物对5个大白菜杂交组合进行鉴定，试验结果表明引物51、53、54、57、62、72能使5个杂交种及其亲本有效地区分开。

然而，现有研究仍存在一些不足与空白。在遗传多样性研究中，对于不同地域、不同生态环境下青麻叶大白菜遗传多样性的综合分析还不够全面，且部分研究样本数量有限，可能影响结果的普适性。在杂交种纯度分子鉴定方面，虽然已有多种技术应用，但针对青麻叶大白菜杂交种的特异性分子标记筛选还不够深入，部分鉴定方法的成本较高、操作复杂，限制了其在实际生产中的广泛应用。

1.3研究目标与内容

本研究旨在建立青麻叶大白菜遗传多样性研究的分析方法以及杂交种纯度分子检测方法，通过对不同地域和不同品种的青麻叶大白菜进行研究，评估其遗传背景和多样性值，确定杂交种的纯度及亲本之间的遗传距离和区别度，为品种保护、种质利用、品种选育以及提高杂种利用率和种植效益提供技术支持和理论指导。具体研究内容如下：

青麻叶大白菜遗传多样性状况研究

建立青麻叶大白菜遗传多样性研究的分析方法，选取主要的遗传标记，如AFLP、SSR等进行分析。

广泛采集不同地域（包括天津、河北、内蒙古、云南、贵州、广东、广西、山东等地）和不同品种的青麻叶大白菜样品，对