第五章 色谱法.pptVIP

商丘师范学院精品课程建设第五章色谱法第五章色谱法第1页，共37页，星期日，2025年，2月5日人类基因组计划(Humangenomeproject,HGP)1990-2003第2页，共37页，星期日，2025年，2月5日高效毛细管电泳仪器（1）第3页，共37页，星期日，2025年，2月5日高效毛细管电泳仪器（2）第4页，共37页，星期日，2025年，2月5日高效毛细管电泳仪器（3）第5页，共37页，星期日，2025年，2月5日中南大学生物传感所毛细管电泳仪第6页，共37页，星期日，2025年，2月5日20世纪30－40年代蒂塞利乌斯(A.W.K.Tiselius)(1902－1971)建立了移动界面电泳，将电泳发展成分离技术获得1948年诺贝尔化学奖§5-11毛细管电泳概述第7页，共37页，星期日，2025年，2月5日毛细管电泳，CapillaryElectrophoresis(CE)，又称高效毛细管电泳(HPCE)。1981年J.W.Jorgenson,K.D.Lukacs实验上和理论上为毛细管电泳的发展奠定了基础。它是一种新型分离分析技术，乃经典电泳技术和现代微柱分离有机结合的产物，是继高效液相色谱(HPLC)之后分析科学领域的又一次革命。第8页，共37页，星期日，2025年，2月5日CE与经典电泳两项重要改进：一是采用了50—100μm内径的毛细管；二是采用了高达数万伏的电压。第9页，共37页，星期日，2025年，2月5日CE与HPLCCEHPLC柱效高(105～107理论塔板)中等分析时间较短较长进样体积小(纳升级)较大大小分子可同时分析每种柱子只适合一定分子量范围色谱柱毛细管易清洗，更换费用低不易清洗，产生死吸附，更换费用高溶剂消耗少，费用低，污染小消耗大量有机溶剂，费用高，污染大检测器种类少，紫外检测灵敏度低种类多，紫外检测灵敏度高分离重现性较差，定量精密度RSD3~5%分离重现性较好，定量精密度RSD1%组分收集难易第10页，共37页，星期日，2025年，2月5日CE的特点1.仪器简单、易自动化电源、毛细管、检测器、溶液瓶2.分析速度快、分离效率高3min内分离36种无机及有机阴离子，4min内分离了24种阳离子；分离柱效：105～107/m理论塔板数；3.操作方便、消耗少进样量极少，水介质中进行；4.应用范围极广有机物、无机物、中性分子、生物大分子等；分子生物学、医学、药学、化学、环境保护、材料等；?美国药典?、?中国药典?等药典均已收录毛细管电泳法。第11页，共37页，星期日，2025年，2月5日数据来源：Webofscience,2009.11检索主题词：CapillaryElectrophoresis第12页，共37页，星期日，2025年，2月5日数据来源：国家自然科学基金委,2009.11检索主题词：毛细管电泳第13页，共37页，星期日，2025年，2月5日§5-12毛细管电泳基本原理CE泛指以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和/或分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术。CE分离的基础第14页，共37页，星期日，2025年，2月5日第15页，共37页，星期日，2025年，2月5日带电粒子在电场下的迁移速度（电泳速度）为：νe=μeEE:电场强度，是指单位距离的电压降（V/cm）μe：电泳淌度，是指单位电场下带电粒子的迁移速度。电泳淌度不同是电泳分离的基础。CE分离的基础第16页，共37页，星期日，2025年，2月5日如果检测器在阴极端，能否检测负离子？第17页，共37页，星期日，2025年，2月5日电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流（electroosmoticflow，简称EOF）。电渗流EOF第18页，共37页，星期日，2025年，2月5日EOF动画第19页，共37页，星期日，2025年，2月5日毛细管中的电解质由于同时受到电泳和电渗流两种驱动力，在毛细管中的迁移速度等于电泳速度和电渗流速度的矢量和。迁移速度V0=VEOF±