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基于RF-SRCA技术的猪肉及制品中小肠结肠炎耶尔森氏菌精准检测研究

一、引言

1.1研究背景

小肠结肠炎耶尔森氏菌（Yersiniaenterocolitica）是一种重要的人畜共患病原菌，广泛分布于自然界中，对食品安全与人类健康构成严重威胁。该菌能在低温环境下生长繁殖，这一特性使其极易在冷藏食品中存活，进而增加了人类感染的风险。据统计，全球每年因小肠结肠炎耶尔森氏菌感染导致的病例数以万计，尤其在卫生条件相对较差的地区，发病率更高。

猪肉及其制品作为人们日常饮食中的重要组成部分，受小肠结肠炎耶尔森氏菌污染的现状不容乐观。猪是该菌的主要宿主之一，在生猪养殖、屠宰、加工及运输等环节中，若卫生控制措施不到位，就极易造成猪肉及其制品的污染。相关研究表明，在一些地区的市场抽检中，猪肉及其制品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检出率可达10%-20%。一旦人们食用了被污染的猪肉及其制品，就可能引发急性小肠结肠炎、肠系膜淋巴结炎、败血症等疾病，严重时甚至会危及生命。

传统的小肠结肠炎耶尔森氏菌检测方法主要包括细菌培养、生化试验和血清学试验等。细菌培养法虽然是检测的“金标准”，但其操作繁琐、耗时长，一般需要3-7天才能得出结果，且容易受到其他杂菌的干扰；生化试验和血清学试验虽相对简便，但存在特异性和灵敏度较低的问题，难以满足快速、准确检测的需求。因此，开发一种高效、快速、准确的检测方法迫在眉睫。

1.2研究目的与意义

本研究旨在利用实时荧光跨越式滚环等温扩增（Real-timefluorescencesaltatoryrollingcircleamplification，RF-SRCA）技术，建立一种快速、准确检测猪肉及其制品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法。通过优化反应条件、筛选特异性引物和探针等，提高检测的灵敏度和特异性，并对实际样品进行检测验证，评估该方法的实用性和可靠性。

本研究具有重要的实际意义。一方面，该方法的建立可为猪肉及其制品的质量安全检测提供有力的技术支持，有助于及时发现和控制污染，保障消费者的身体健康；另一方面，相比于传统检测方法，RF-SRCA技术具有操作简便、检测速度快、无需昂贵设备等优点，能够降低检测成本，提高检测效率，有利于在基层检测机构和生产企业中推广应用，对于加强食品安全监管、促进肉类产业的健康发展具有积极的推动作用。

1.3国内外研究现状

在小肠结肠炎耶尔森氏菌检测方面，国内外学者已开展了大量研究。国外研究起步较早，在分子生物学检测技术方面取得了诸多成果。例如，美国食品药品监督管理局（FDA）已认可多种基于PCR技术的检测方法用于食品中该菌的检测，这些方法在灵敏度和特异性上有了显著提升，但仍存在操作复杂、需要专业技术人员和昂贵仪器设备等问题。

国内研究也在不断跟进，除了对传统检测方法进行优化改进外，也积极探索新的检测技术。如免疫磁珠分离技术与PCR相结合，提高了检测的灵敏度和分离效率；基于核酸适配体的检测方法也展现出良好的应用前景，其特异性强、稳定性好，但目前仍处于研究阶段，尚未广泛应用于实际检测。

在RF-SRCA技术应用方面，国外已有部分研究将其用于病毒、细菌等病原体的检测，并取得了较好的效果。该技术利用特殊的引物和DNA聚合酶，在等温条件下实现核酸的快速扩增，通过实时监测荧光信号的变化，能够快速准确地判断样品中是否存在目标病原体。国内对RF-SRCA技术的研究相对较少，主要集中在理论探索和初步应用阶段，将其应用于猪肉及其制品中小肠结肠炎耶尔森氏菌检测的研究尚未见报道。

1.4研究方法与创新点

本研究采用的方法主要包括：首先，根据小肠结肠炎耶尔森氏菌的保守基因序列，设计特异性引物和探针，用于RF-SRCA反应；然后，对反应条件进行优化，包括引物和探针浓度、反应温度、反应时间等，以提高检测的灵敏度和特异性；接着，利用优化后的RF-SRCA方法对纯培养的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行检测，确定其检测限；最后，采集猪肉及其制品实际样品，运用该方法进行检测，并与传统检测方法进行对比，验证其准确性和可靠性。

本研究的创新点主要体现在方法和应用上。在方法上，RF-SRCA技术具有独特的等温扩增优势，无需复杂的温度循环，操作简便，能够在较短时间内完成检测，且检测过程中可实时监测荧光信号，结果判断更加直观准确。在应用上，首次将RF-SRCA技术应用于猪肉及其制品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测，为该领域的检测提供了新的技术手段，填补了国内相关研究的空白，有望为猪肉及其制品的质量安全检测带来新的突破。

二、小肠结肠炎耶尔森氏菌概述

2.1生物学特性

小肠结肠炎耶尔森氏菌属于肠杆菌科耶尔森氏菌属，是一种革兰氏阴性杆菌或球杆菌，大小通常为