第十九章放射免疫技术71课件.pptVIP

一、检测原理IRMA属于非竞争性免疫结合反应，其基本检测原理是将放射性核素（125I）标记在抗体上，并用过量的标记抗体与待测抗原进行非竞争性结合反应，并采用固相免疫吸附方式对B和F进行分离。检测免疫复合物的放射性，从而得到待检样本的浓度。二、方法与类型（一）单位点IRMA（二）双位点IRMA人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社第十九章放射免疫技术放射免疫技术的基本概念及类型放射标记物的鉴定与纯化。RIA和IRMA的测定原理及关键技术。RIA和IRMA的临床应用与评价本章要点放射免疫技术是将放射性核素高敏感的示踪特点和抗原抗体反应的高特异性特点相结合的一种体外测定超微量物质的新技术。其基本模式是应用放射性核素标记抗原或抗体，通过免疫反应进行定量测定。具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，在医学检验中得到了广泛应用。放射免疫技术根据其方法学原理的不同主要有两种类型：RIA和IRMA。前言第一节放射性核素和放射性标记物的制备放射性核素作为放射性免疫技术的标记物，选择何种放射性核素以及如何制备放射标记物（将放射性核素与抗原或抗体连接），是建立放射免疫技术的基础。一、放射性核素的基本知识基本概念指在自然条件下可发生自发性的转化，由一种放射性核素转变成另一种放射性核素，并同时释放射线（α、β、γ），又称为放射性衰变。基本类型依据其衰变方式α衰变、β衰变、γ衰变最常用的放射性核素是125I125I的优点化学性质比较活泼，标记方法简单，且容易获得高比活性的标记物；在衰变过程中产生γ射线，便于测量且效率高；半衰期适中（60天左右），且废弃物较容易处理。125I的缺点用125I取代H，可能使原物质免疫活性受到影响；易因发生辐射损伤而使标记抗原变性；作为商品化试剂的产品货架期较短。放射性核素放射活性的检测利用射线照射闪烁体（NaI晶体），导致晶体分子激发，在退激发时，闪烁体发出一定波长的荧光；再由光电倍增管将极微弱的荧光转换成光电子并放大107倍；从光电倍增管输出的电信号经过放大器放大，经单道分析器甄别处理，并在定标器上显示。二、放射性核素标记抗原抗体方法主要包括间接标记法直接标记法（氯胺T法）三、放射标记物的纯化与鉴定（一）放射标记物的纯化因游离的125I与125I标记抗原（抗体）分子的大小相差悬殊，故采用凝胶层析即可进行分离纯化聚合、损伤物标记蛋白游离125I比放射活性放射化学纯度应大于95%免疫活性（二）放射标记物的鉴定放射化学纯度是指在标记物中结合在抗原（或抗体）上的放射活性占该标记物总放射活性的百分比。免疫活性是指标记物与抗原（或抗体）反应的能力，反应标记过程中被标记物免疫活性受损的情况。比放射活性是指单位质量标记物中所含的放射性强度。第二节放射免疫分析放射免疫分析（RIA）是以放射性核素标记的抗原（Ag*）与未标记抗原（Ag）竞争结合特异抗体（Ab）来对待检样品中的抗原进行定量测定的一种技术。一、检测原理RIA属于竞争性分析，其基本原理是由于Ag*和Ag（待测物Ag)对特异性抗体具有相同的结合力，当三者同时存在于同一反应体系时，Ag*和Ag相互竞争结合特异性抗体。Ag*和Ag具有等同的与Ab结合能力Ab限量，Ag*定量,Ag*和Ag的量大于Ab结合位点，二者通过竞争方式与Ab结合；随着Ag增加，Ag*与Ab结合形成Ag*Ab复合物的放射量降低,二者变化成函数关系。(标准Ag/样品Ag)二、方法与类型非平衡法，即标准品抗原（或待检样本）和特异性抗体，优先使非标记抗原与特异性抗体达到平衡，然后再加入标记抗原竞争与抗体结合。两种类型平衡法，即标记抗原、标准品抗原（或待检样本）、特异性抗体同时加入反应体系中。三、关键技术抗原抗体反应分离结合标记物（分离技术）放射性测定数据处理Ag*Ag反应条件体积温度时间pHAb(标准Ag/样品Ag)（一）抗原抗体反应牢固的抗原抗体复合物抗原-抗体反应是将抗原、标记抗原和抗血清按顺序定量加入小试管中，在一定条件下反应一定时间，使竞争抑制反应达到平衡。不同含量的抗原和不同抗体对反应的温度和时间的要求不同。反应温度和时间可依据待测抗原的含量、理化性质和所用抗体亲和力大小等条件进行选择。二抗体沉淀法PEG沉淀法PR试剂法活性炭吸附法分离彻底，迅速分离