分子遗传学理论与技术基础.ppt

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2025-10-28 发布于北京
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分子遗传学理论与技术基础.ppt

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（优选）分子遗传学理论与技术基础第一页，共27页。

ifthetargetgenecanexpressinhostcellinordertoreformthehostcell’strait,thatiscalledgeneengineering.Abovetechnologyprocessisalsocalledacommunityname---DNArecombinant.第二页，共27页。

2.TechnologystepsofDNArecombinant.鄂p341,p348图15-5.(1)toisolatethetargetgeneDNAfragmentandthevectorDNA,thentomodifywithsametoolenzyme.(2)ligasereactionligatethetargetgeneDNAandvectorDNAintorecon.(3)therecontransformatethehostcell.thereisonlyonereconinonehostcell.(4)thetransformatedhostcellsareculturedinplatemedium,thentoscreenthetargetgenecellcloneforcloneamplify.第三页，共27页。

3.Thekeyknowledgepoints:1)ToolEnzyme.鄂P299.[concept]:therearemanytypesenzymes,Theirfunctionaredifferent,thataregotfrombiont’scells(muchfrombacteria).Theseenzymesworkasusefultoolsingeneoperationexperiment,so,becalledtoolenzyme.第四页，共27页。

*typesandfunctionoftoolenzyme.(1)RestrictionEndonuclease(RE).*REcanidentifyaspecificbasesequenceofdsDNAmolecular,thentohydrolysisthephosphodiesterbondofdsDNAinendodigetionway.*thetypesofRE:TypeIspecificityunstrength.TypeIIITypeIIdigetionpointisspecific,veryuseful.therearenear100kinds.鄂p304表。第五页，共27页。

*thebioactivityofREtypeII

鄂P301.[reactionenvironment]~temperature:37℃generally,stockat-20℃and-70℃forlongtime.~reactionpH7.2-7.6~helperfactors:[Mg]++,BSA(牛血清白蛋白)[reactionactivity]REactivityunit(u):undercomfortablecon-dition,the1uenzymevolumecandigest1ugDNAin50ulreactionsolutionin1htime.第六页，共27页。

[reactionresults]Bluntend:HapIdigested:5’GTTAAC3’3’CAATTG5’Cohesiveend,EcoRIdigested:5’GAATTC3’3’CTTAAG5’*thedifferentREcanidentifythedifferentseque-nc