高效液相色谱法中.pptVIP

因为不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，有可能使被分离的两个组分的分配系数不等，即α≠1。改变流动相中各种溶剂的配比，能改变其洗脱能力，组分的k也改变。在正相色谱法中，增加流动相中强溶剂的比例，其洗脱能力增强，使k变小。第30页，共75页。流动相的极性可用Snyder提出的溶剂极性参数P′来表示。Snyder选择了三种参考物质，乙醇（质子给予体），二氧六环（质子受体）和硝基甲烷（强偶极体）用来检验溶剂的质子接受能力（Xe），给予质子能力（Xd）和偶极作用力（Xn）。（三）溶剂的强度和选择性1．溶剂的极性和强度第31页，共75页。Snyder提出的溶剂极性参数是根据罗胥那德（Rohrschneider）的溶解度数据推导出来的，将罗氏提供的极性分配系数()以对数的形式表示。纯溶剂的极性参数(P)定义为：P值越大，则溶剂的极性越大，在正相色谱中的洗脱能力越强。第32页，共75页。表20-1常用溶剂的极性参数P和选择性参数溶剂PXeXdXn溶剂PXeXdXn正戊烷0.0———乙醇4.30.520.190.29正己烷0.1———醋酸乙酯4.40.340.230.43苯2.70.230.320.45丙酮5.10.350.230.42乙醚2.80.530.130.34甲醇5.10.480.220.31二氯甲烷3.10.290.180.53乙腈5.80.310.270.42正丙醇4.00.530.210.26醋酸6.00.390.310.30四氢呋喃4.00.380.200.42水10.20.370.370.25氯仿4.10.250.410.33第33页，共75页。反相键合相色谱法的溶剂强度常用S表示常用溶剂的S值列于表20-2在正、反相色谱法中，溶剂的洗脱能力大体相反。例如，在正相洗脱时，水的洗脱能力最强（P最大，为10.2），而在反相洗脱时，水的洗脱能力最弱（S最小，为0）。第34页，共75页。表20-2反相色谱常用溶剂的强度因子（S）水甲醇乙腈丙酮二噁烷乙醇异丙醇四氢呋喃03.03.23.43.53.64.24.5第35页，共75页。2．混合溶剂的强度用于正相键合相色谱法的多元混合溶剂的强度，用极性参数来表示，其值为各组成溶剂极性参数的加权和：——纯溶剂i的极性参数?i——该溶剂在混合溶剂中的体积分数。第36页，共75页。反相色谱法的混合溶剂的强度因子用类似方法计算：第37页，共75页。三、分离条件的选择(一)高效液相色谱法中的速率理论1．涡流扩散A=2λdp为了降低涡流扩散的影响，HPLC中一般使用3~10μm的小颗粒固定相，目前有2μm以下的固定相。为了填充均匀，减小填充不规则因子，常采用球形固定相，而且要求粒度均匀（RSD＜5%）。此外，HPLC色谱柱以匀浆高压填充。第38页，共75页。2．纵向扩散Dm与流动相的黏度（η）成反比，与温度成正比。在HPLC中，流动相是液体，其黏度比气体黏度大得多（约102倍），而且常在室温下进行操作，因此组分在流动相中的扩散系数Dm比气相色谱的要小得多（为10?5倍左右）。而且HPLC的流速一般都在最佳流速以上，这时纵向扩散项很小，可以忽略。第39页，共75页。（1）固定相传质阻抗通常采用化学键合相，它的“固定液”是键合在载体表面固定液官能团的单分子层，所以，固定液的传质阻抗可以忽略，于是C=Cm+Csm3．传质阻抗C=Cm+Csm+Cs第40页，共75页。（2）流动相传质阻抗在一个流路中处于流路中心的分子和处于流路边缘的分子与固定相的作用力不同，迁移速率不同，处于流路边缘的分子与固定相的作用力大于处于流路中心的分子，迁移速率相对慢于处于流路中心的分子，因而使峰变宽。第41页，共75页。（3）静态流动相传质阻抗由于固定相是多孔性的，使部分流动相滞留在固定相微孔内部。静态流动相传质阻抗是分子进入处于固定相较深孔穴内的静止流动相中，而晚回到流