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HPLC培训峰与色谱条件;

基本原理

加样流动相流动相

A

C

BB

CA

固定相——柱内填料，流动相——洗脱剂。

HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。

;基本操作;

流动相的配制

①配制用水最好用蒸馏水（注射水）

②称量、量取、调pH时尽可能精确

③流动相必须用0.45um滤膜过滤，注意区分有机膜、无机膜

④加入甲醇或乙腈后要混合充分

⑤流动相必须经过脱气（常用方法是超声脱气）

⑥配制所用的试剂尽可能用色谱纯，如没有色谱纯可用分析纯代替

⑦流动相应现用现配制，染菌的流动相禁止使用

⑧配制过程中应注意自我保护

;

流动相使用前为什么要脱气？;

色谱柱的良好使用规范;最常用的“万能柱”填料为“C18”，简称“ODS”柱，即十八烷基硅烷键

合硅胶填料（Octadecylsilyl，简称ODS）。这种填料在反相色谱中发挥

着极为重要的作用，它可完成高效液相色谱70～80％的分析任务。

由于C18(ODS)是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，对

各种类型的生物大分子有更强的适应能力，因此在生物化学分析工作中应

用的最为广泛。

按键合到基质上的官能团可分为：

⑴反相柱：填料为非极性，官能团为烷烃，例如：C18(ODS)、C8、C4等。

⑵正相柱：填料为极性，官能团为－CN氰基、－NH2氨基等。

⑶离子交换键合相：

阳离子官能团：－SO3H磺酸基、－COOH羧基等。

阴离子官能团：―R4N＋季铵基、-氨基等。

（由于???胶基质的键合相只能在pH＝2～7.5的范围内使用，而离子交换色谱要求有更宽的pH范围，因此其基质现在仍主要使用聚苯乙烯和二乙烯苯）;

色谱柱的故障诊断--基线噪音;色谱柱故障诊断--基线漂移;

色谱柱故障诊断--鬼峰;

色谱柱故障诊断--峰形问题;色谱柱故障诊断--峰形问题;

色谱柱故障诊断--峰形问题;

色谱柱故障诊断--峰形问题;手动进样器的使用、维护;系统适应性试验;色谱柱的理论塔板数（n）;分离度（R）;重复性;拖尾因子（T）;系统适应性试验

1.理论塔板数n

2.分离度（R≥1.5）

3.重复性RSD=0.1%

4.拖尾因子T=1.04

;替硝唑含量;含量测定-内标法;含量测定-外标法;替硝唑有关物质;有关物质;谢谢大家！