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利用分裂绿色荧光蛋白技术鉴定布鲁氏菌分泌蛋白的研究

目录

一、文档概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.1布鲁氏菌感染的重要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.2分裂绿色荧光蛋白技术在生物学研究中的应用．．．．．．．．．．．．．．．5

1.3研究目的与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

二、文献综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

2.1布鲁氏菌分泌蛋白的研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

2.1.1分泌蛋白的生物学特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

2.1.2分泌蛋白与布鲁氏菌致病性的关系．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

2.2分裂绿色荧光蛋白技术的发展及应用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

2.2.1分裂绿色荧光蛋白的特性和优势．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

2.2.2分裂绿色荧光蛋白技术在细胞生物学中的应用．．．．．．．．．．．．20

三、实验材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

3.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

3.1.1布鲁氏菌菌株及培养条件．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

3.1.2分裂绿色荧光蛋白质粒及细胞株．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

3.2实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

3.2.1布鲁氏菌分泌蛋白的提取与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

3.2.2分裂绿色荧光蛋白技术的实施．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

3.2.3分泌蛋白的鉴定与功能分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

四、实验结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

4.1分裂绿色荧光蛋白在布鲁氏菌中的表达情况．．．．．．．．．．．．．．．．40

4.2布鲁氏菌分泌蛋白的鉴定结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

4.2.1蛋白质谱分析结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

4.2.2生物信息学分析结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45

4.3分泌蛋白的功能研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46

4.3.1分泌蛋白对宿主细胞的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51

4.3.2分泌蛋白在布鲁氏菌致病过程中的作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．53

五、讨论与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．56

5.1实验结果的分析与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．58

5.1.1分泌蛋白的鉴定准确性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．59

5.1.2分泌蛋白功能研究的启示．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．61

5.2实验方法的优缺点及改进建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62

5.2.1分裂绿色荧光蛋白技术的优缺点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．64

5.2.2实验方法的改进建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．66

六、结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．68

6.1研究结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．69

6.2研究创新点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．70

6.3展望与建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．72

一、文档概述

本研究所致力于透彻探究布鲁氏菌（Brucellaspp.）的分泌蛋白组学，并巧妙运用分裂绿色荧光蛋白（Sp