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病理科肺癌组织学诊断流程演讲人：日期:

目录CATALOGUE02组织切片制备03染色技术应用04显微镜下观察05诊断标准执行06报告生成与审核01标本接收与处理

01标本接收与处理PART

样本接收标准与记录接收时需核对样本标签与申请单信息是否一致，包括患者姓名、样本类型及部位，确保无遗漏或错误。对破损或标识不清的样本需记录并反馈临床科室。完整性核查交接记录规范化特殊样本处理采用电子化系统登记样本接收时间、送检医师及接收人员信息，同时记录样本状态（如新鲜、固定或冰冻），确保全程可追溯。针对术中快速送检样本，需优先处理并标注“急查”，避免延误诊断周期。

常规组织固定采用10%中性缓冲福尔马林，其渗透性强且能保持抗原性，适用于后续免疫组化检测。避免使用酸性固定液导致组织收缩或核酸降解。固定液选择与浸泡流程中性缓冲福尔马林优选组织块厚度不超过3mm时，固定时间需控制在6-48小时内，过短易导致固定不充分，过长可能影响分子检测结果。大标本需剖开并延长固定时间。固定时间控制对于需保留RNA的样本（如基因检测），可选用RNA稳定剂预固定，或直接速冻保存于液氮中，避免反复冻融。特殊样本处理

组织类型分类每份样本需标注唯一病理编号及患者信息，采用防水标签或激光刻印，防止脱落或字迹模糊。高风险样本（如传染性病例）需加贴生物危害标识。双标识系统影像学关联记录对影像引导下取材的样本，需在系统中关联CT或超声图像，标注取材具体位置（如肺叶、段），辅助病理医师定位病变区域。根据样本来源（如穿刺活检、手术切除或淋巴结）分类编号，区分肿瘤组织与正常对照组织，避免混淆。初步分类与标识规范

02组织切片制备PART

包埋材料与技术要点需选用高纯度、低熔点的石蜡，确保组织硬度和切片完整性，同时避免高温导致抗原表位破坏。石蜡包埋选择标准采用梯度酒精脱水后，使用二甲苯透明化，彻底去除水分和脂质，保证包埋后组织无收缩或裂隙。组织脱水与透明化处理包埋模具需定期检查平整度，避免倾斜导致切片厚度不均，影响后续染色和诊断准确性。包埋模具校准010203

切片厚度与质量控制标准厚度控制常规诊断切片厚度通常为4-6微米，过厚易导致细胞重叠，过薄可能造成组织撕裂或染色不均。切片完整性检查每批次切片需在显微镜下观察是否存在刀痕、褶皱或气泡，不合格切片需重新制备。防脱片处理采用多聚赖氨酸或硅烷化玻片预处理，防止组织在染色过程中脱落，尤其对纤维化或坏死区域至关重要。

细微结构保存方法快速固定技术组织离体后立即投入10%中性缓冲福尔马林，固定时间控制在6-12小时，避免过度固定导致组织脆化。低温包埋优化针对肺泡结构或微乳头状成分，可结合PAS或弹力纤维染色，增强细微结构的显影对比度。对含脂质或黏液成分的样本，可采用低温石蜡包埋（≤45℃），减少组织变形和成分流失。特殊染色辅助

03染色技术应用PART

常规染色操作步骤脱水后的组织经透明化处理后进行石蜡包埋，切片厚度控制在4-5微米，保证切片平整无皱褶。石蜡包埋与切片制备苏木精-伊红（HE）染色染色质控与复染样本需经中性缓冲福尔马林充分固定，随后通过梯度乙醇脱水，确保组织形态结构完整性和后续染色效果。切片经脱蜡、水化后依次进行苏木精核染色、分化返蓝、伊红胞质染色，最后脱水封片，形成清晰的细胞核与胞质对比。每批次染色需设置阳性对照，染色后显微镜下评估细胞核深浅、胞质着色均匀度，必要时进行复染调整。组织固定与脱水处理

特殊染色选择依据弹力纤维染色（EVG）用于鉴别肺腺癌与间皮瘤，弹力纤维在间皮瘤中呈特征性层状分布，而腺癌中则断裂或缺失状纤维染色（银染）适用于小细胞癌与淋巴瘤鉴别，小细胞癌中网状纤维围绕肿瘤细胞团分布，而淋巴瘤则呈弥漫性浸润模式。黏液染色（PAS/AB）针对疑似黏液腺癌病例，PAS染色可显示中性黏液，阿尔辛蓝（AB）染色则突出酸性黏液，辅助亚型分类。刚果红染色怀疑淀粉样变性时使用，刚果红染色后在偏振光下呈现苹果绿色双折光，明确淀粉样物质沉积。

根据形态学初筛结果选择抗体组合，如TTF-1/NapsinA用于肺腺癌，p40/p63用于鳞癌，CD56/Syn/CgA用于神经内分泌肿瘤。抗体选择与组合策略采用多步聚合物法或酪胺信号放大（TSA）技术增强弱表达抗体的显色强度，提高低丰度靶标检出率。信号放大系统应用针对不同抗体优化修复条件，如高温高压修复适用于多数核抗体（如TTF-1），而酶消化修复更适合膜蛋白（如PD-L1）。抗原修复条件调控每张切片需包含内对照组织（如正常肺泡或支气管上皮），阳性判定需结合染色定位（核/质/膜）及强度阈值（如PD-L1的TPS评分）。内对照与阈值设定免疫组化染色优化

04显微镜下观察PART

组织形态学评估标准观察腺泡状、乳头状或微乳头状结构，评估肿瘤细胞是否呈现立方或柱状形态，胞