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TransformationSteps
1.Thawonevialofcellsonicepertransformation.
2.Add5–10ngof,inavolumeof1–5μLtothecellsandmixbytappinggently.Donotmixcellsbypipetting.
3.Incubatethevial(s)onicefor30minutes.
4.Heatshockthecellsbyincubatingthevial(s)forexactly30secondsinthe42°Cwaterbath.Donotmixorshake.
5.Removethevial(s)fromthe42°Cbathandquicklyceonice.
6.Add250μLofpre-warmedSOCtothevial(s).(SOCisarich;usepropersterile
techniquetoavoidcontamination.)
7.Securethevial(s)inamicrocentrifugerackwithtape.cetherackinashakingincubator,andshakethe
vial(s)at37°Cfor1hourat225rpm.
8.tetwodifferentvolumesofthetransformationreactionontoLBtescontainingtheappropriateantibioticfor
smidselection.Include34μg/mLchloramphenicolifusingBL21(DE3)pLysSorBL21(DE3)pLysEcells.Selecttwo
volumesrangingfrom20–200μLtoensurewell-spacedcoloniesonatleastonete.Theremainingtransformation
reactionmaybestoredat4°Candtedoutthenextday,ifneeded.
9.Invertthetesandincubateat37°Covernight.
10.Selecttransformantsfromthetesandcultureasdescribedonpage8.
Note:Clonesmayexhibitdifferencesinexpressionofheterologousgenes.Werecommendchoosing3–4
transformantswhencharacterizingclonesforproteinexpression.
ExpressionSteps
1.Pick3–4transformantsforovernightculturein5mLLBcontainingantibiotictoselectforyourexpression
smid.IfusingBL21(DE3)pLysSorBL21(DE3)pLysE,add34μg/mLchloramphenicoltoselectforpLysSorpLysE.
Growovernightat37°Cwithshakingtosaturation(OD600≥2).
2.UsetheovernightculturestoinoculatefreshLBcontainingantibioticto
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