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高效液相色谱法高效液相色谱法
01简介高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography\HPLC）色谱法的重要分支；以液体为流动相，用高压输液泵，将流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，实现对试样的分析。该方法在化学、医学、工业、农学等领域中广泛应用。
高效液相色谱仪基本构造及整体运行情况色谱分离系统运行的基本原理0102含量测定方法03
02高效液相色谱仪基本结构
（一）HPLC的基本组成--色谱分离系统02高效液相色谱仪基本结构1.色谱柱
（一）HPLC的基本组成--色谱分离系统02高效液相色谱仪基本结构2.进样器手动进样器手动进样器自动进样器自动进样器
02高效液相色谱仪基本结构（一）HPLC的基本组成-进样系统
（一）HPLC的基本组成--色谱分离系统02高效液相色谱仪基本结构自动进样器是怎样工作的？
（一）HPLC的基本组成--色谱分离系统02高效液相色谱仪基本结构3.高压输液泵包括溶剂柜、真空脱气机、溶剂混合器、高压泵等，其中核心部分是泵，提供足够的驱动力使流动相通过填充紧密的色谱柱。
（一）HPLC的基本组成--色谱分离系统02高效液相色谱仪基本结构4.检测器及显示器主要有紫外检测器、荧光检测器等。要求：灵敏度高、重现性好、对温度变化不敏感等。
02高效液相色谱仪基本结构高压输液泵进样系统分离系统检测系统显示系统
02高效液相色谱仪基本结构
高效液相色谱法用于含量测定有外标法、内标法、加校正因子的主成分自身对照法、不加校正因子的主成分自身对照法和面积归一化法。02高效液相色谱仪基本结构（二）含量测定《中国药典》一部收载的中药制剂的含量测定绝大多数采用的是高效液相色谱法中的外标法和内标法，其中外标法最为常用。含量测定方法中药活性成分代表中药制剂高效液相色谱外标法黄芩苷柴黄片、防风通圣丸、健儿消食口服液等大黄素和大黄酚黄连上清丸、复方大青叶合剂、冰黄肤乐软膏等绿原酸金嗓开音丸、小儿咽扁颗粒、银翘解毒颗粒等丹皮酚六味地黄丸、桂枝茯苓胶囊、杞菊地黄丸等
利用色谱峰的峰面积与待测组分浓度成正比的原理，以待测组分的标准品作对照品，分别用高效液相色谱仪测得待测组分和对照品色谱峰的峰面积，从而进行定量计算。02高效液相色谱仪基本结构（二）含量测定1.外标法-定量依据
外标法可分为标准曲线法（工作曲线法）、外标一点法、外标二点法。02高效液相色谱仪基本结构（二）含量测定2.外标法需要注意的是外标法对于进样体积的要求非常严格，为控制每次进样的体积不发生明显偏差，最好采用手动进样器定量环或自动进样器来操作。
02高效液相色谱仪基本结构（二）含量测定3.外标法-胃舒宁颗粒中甘草酸的含量测定（1）色谱条件和系统适用性试验①填充剂：C18②流动相：乙腈-0.017mol/L磷酸盐溶液（35：65）③检测波长：250nm（2）对照品溶液的制备C甘草酸=97.95μg/ml（3）供试品溶液的制备每袋装5g，W样=0.3021g，V供=22.5ml（4）测定法A对=150322A供1=109751（5）含量要求本品每袋含甘草以甘草酸（C42H62O16）计，不得少于20mg
02高效液相色谱仪基本结构（二）含量测定3.外标法-胃舒宁颗粒中甘草酸的含量测定
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