不规则抗体筛查和抗人球实验标准操作SOP.docxVIP

不规则抗体筛查和抗人球实验标准操作SOP

一、红细胞血型抗体筛查标准操作程序

红细胞血型抗体检查适用于下列情况：

1.ABO血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时；

2.供血者血清抗体筛检；

3.输血前受血者血清抗体检查；

4.输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时；

5.孕妇血清的抗体检查；

6.新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查；

7.直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体检查。

筛查方法：

一、盐水介质法：

【方法原理】

有些抗体能凝集盐水混悬的红细胞。这些抗体通常是IgM类抗体，其中许多在22℃下反应最好。在室温下有活性而在37℃无活性的抗体是没有什么临床意义的。对患者或供血者的血样不需要用这种方法。在37℃下也有活性的样本(如抗Kell,抗D)是有临床意义的，而这些抗体通常可用抗人球蛋白试验和酶技术来检查。

【试剂】

1.试剂红细胞：由血型参比实验室或血液中心提供，或由各血库从供血者或工作人员中进行普查得到。筛查红细胞以2个或3个人抗原互补的不同的红细胞为1套，单独分开分装，因为单一的筛查红细胞较混红细胞提供较高的敏感性。

因为许多抗体同双倍量抗原(纯合子)的红细胞反应比同单倍量抗原(杂合子)的红细胞反应要强得多，而不可能得到的都是纯合子红细胞，因此，筛查红细胞的抗原组成必须是互补，经提供尽可能多的必要的抗原。筛查红细胞大多不包括低频率抗原，所以不可能检出低频率抗体。这种抗体只有在抗体鉴定时被测到，或在交叉配血时被发现，或在新生儿出生后出现黄疽时被发现。每一组筛查红细胞中至少有常见的抗原，而且是互补的。

如果某种抗体只能与一种特定抗原的纯合子细胞起反应，而筛查红细胞上这种特定抗原是杂合子，则该抗体可能被漏检。合适的纯合子表现型的供血者是很少的，为了提供有重要抗原的纯合子细胞，需要使用来自3个供血者的红细胞。

2.血清标本：虽然血清和血浆中存在相同的红细胞抗体，但一般都采用血清进行抗体检查。因为：①如果血浆中的凝血系统发生部分激活，就可产生纤维蛋白，干扰对凝集的解释；②只有通过激活补体的作用才能证实的抗体，不能在血浆中检出；③常用的抗凝剂是结合Ca?+来防止凝固，而Ca?+对于补体的激活是必不可少的。

血清标本的采取时间应注意：例如，受血者血样一定要在48h内采集。为了检出由于最近红细胞刺激而产生的抗体，血样必须是新近的。如果抗体筛查结果阴性，有时需要隔数天后重新采样复查，因为此时抗体的浓度可逐渐增强。每一样本应详细记录病史，包括姓名、性别、年龄、民族、妊娠史、输血史，使用过哪些药物(如甲基多巴、青霉素、先锋霉素等)、采样日期、有无抗凝剂、抗凝剂的种类和剂量、血液样本的外观、有无溶血、黄疽以及红细胞比积等。

【操作步骤】

1.取受检者血清2滴于标好的试管中。

2.取2%试剂(筛查)红细胞悬液1滴于每个试管中，混和。3.1000r/min离心1min(离心速度和时间应按质控规定)。

4.观察溶血和凝集反应，记录结果。

5.按需要置室温(22～24℃)温育15～30min。

6.离心，观察溶血和凝集，并记录结果。溶血或凝集都是阳性结果。

7.报告结果于检验之星中。

二、凝聚胺法【方法原理】

利用低离子介质(LIM),降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清(浆)中的抗体结合。加入凝聚胺可使红细胞产生非特异性的凝聚。最后，加入悬浮液，具有中和凝聚胺的作用，使正常红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。

【标本采集和处理】

1.标本采集：常规静脉采血于分离胶/促凝剂管(血清)、或静脉采血3ml于EDTA.K2(血浆),一般采用血清进行抗体检查。

2.血清标本的采取时间：要求受检者血样一定要在输血前3天内采集，血样必须是新近的。

3.标本分离保存：血清及早分离防止溶血，可冷冻保存，如用冰冻血清作抗体检查，融化后的样本要充分混和，反复冻融的标本不能供抗体鉴定用。

【试剂】

1.抗体筛查I、Ⅱ、Ⅲ细胞。

2.凝聚胺试剂：低离子介质(LIM)、凝聚胺(Polybrene)、悬浮液(Resuspending)。3.3～5%红细胞悬液：取多个“0”型人红细胞，经生理盐水洗涤三次，配成3～5%红细胞悬液。

【操作步骤】

1.准备样本，患者血清(血浆)、抗体筛查I、Ⅱ、Ⅲ细胞或3～5%红细胞悬液。

2.取小试管2支，各加被检血清(浆)2滴，分别加入3～5%筛检红细胞1滴或I和Ⅱ细胞50ul(0.8%)。

3.各加入LIM0.7ml,混合后，加凝聚胺Polybrene2滴，并混合。

4.以3400rpm,