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ABO和Rh(D)血型复检标准操作规程

一、抗A、抗B、抗D血清定型(试管或玻片法)标准操作程序

【方法原理】

1.ABO血型：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，进行红细胞凝集试验。正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。

2.Rh(D)血型：用抗D血清进行鉴定，则凡带有D抗原者称为Rh(D)阳性，不带D抗原者称为Rh(D)阴性。

【标本采集和处理】

1.标本采集：常规静脉采血3ml于EDTA.K2。

2.标本保存；室温放置不超过8小时，4℃保存不超过72小时，无溶血现象。

【试剂】

1.抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)

2.Anti-D(IgM和IgG混合抗体)

3.5%及0型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见附注。

【操作步骤】

1.取小试管3支(或玻片一张划成三等分),分别标明抗A、抗B、抗D,用滴管分别加抗A、抗B、抗D分型血清各1-2滴，再以滴管分别加受检者5%红细胞(取1滴压积红细胞加16滴生理盐水)悬液2滴，混合。

2.另取小试管3支(或玻片一张划成三等分),分别标明A、B、O细胞，用滴管分别加入受检者血清2滴，再分别滴加A、B、O型5%试剂红细胞悬液2滴，混合。

3.立即以1000r/min离心1min(或将玻片不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min)。

4.将试管轻轻摇动，先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低培镜检查。

5.观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。

6.凝集强度判断标准：4+=红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3+=红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2+=红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1+=肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。±=镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。

MF=混合凝集外观(mixedfield)是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。一表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。见表2-1

表2-1ABO血型正反定型结果

分型血清+受检者红细胞

受检者血型

受检者血清+试剂红细胞

抗—A

抗—B

抗—A+B

A细胞B细胞O细胞

十

十

+

十

十

+

+

A

B

0

AB

+

十

十

十

注：+=凝集；-=不凝集。

7.AB注意冷凝集或自身凝集，可以在37℃水浴中鉴别。

8.血型复查结果输入检验之星中，核对后审定报告。

二、RhD血型鉴定标准操作程序

RhD血型系统通过输血或妊娠可产生免疫性抗体，当遇到相应抗原，可致溶血反应或新生儿溶血病。若误诊误治，可导致患者残废或死亡。临床输血时，一般需作助血型鉴定。

一、RhD血型鉴定标准操作程序

【原理】

应用血凝试验检测红细胞抗原。RhD血型是由红细胞表面是存在或缺失D抗原确定。D抗原于细胞株BS226细胞产生的单克隆抗体发生特异性反应。

【试剂】

RhD(IgM)血型定型试剂盒(单克隆抗体)

【操作】

1.盐水法取小试管(10mm×60mm)1支，蜡笔标记，加试剂1滴，再加人5%受检者红细胞1滴，混匀，1000r/min离心1min观察结果。

2.对照管用蜡笔标记阳性和阴性，分别加人抗D血清(IgM)1滴，阳性对照管加Rh阳性红细胞1滴，阴性对照管加Rh阴性红细胞1滴，混匀，1000r/min离心1min观察结果。3.结果判定如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管凝集，即表示受检者红细胞上有相应抗原：受检管不凝集，即表示受检红细胞上没有相应抗原。

【附注】

1.单克隆IgMRh抗血清有商品试剂供应，可用盐水介质做凝集试验。抗血清(IgM)1滴，加5%受检者红细胞悬液1滴，混合，置7℃水浴1h,观察凝集反应。

2.如临床上只要求检查是否为Rh(D)阳性还是阴性，只需用抗D血清进行鉴别。如结果为阴性，则应进一步检查排除弱D。

3.在我国汉族人群中，Rh阳性占99.66%,Rh阴性占0.34%。

4.阳性对照可取3人0型红细胞混合配成。阴性对照一般设计方法为正常AB型血清1滴，加5%D阳性红细胞悬液1滴和菠萝酶试剂混匀，与受检管一同置7℃水浴1h。

5.Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集反应时，凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。

【假阳性反应原因分析】

1.试剂中存在具有其他特异性的抗体(指不完全D抗体),因