苹果树腐烂病菌潜伏侵染量与发病的关系研究.pdfVIP

摘要

苹果树腐烂病是我国苹果产业的重大病害，潜伏侵染是该病害的重要特征，病菌

侵入枝干后可以多达数年不表现症状。因此，该病害的早期预警仍是世界性难题。目

前缺乏陕捷有效的检测手段和预警技术。目前对腐烂病在田间分布型和早期检测的抽

样技术温后春季爆发的原因尚不完全清楚，低温胁迫对腐烂病菌数量在枝条仍缺乏研

究，枝条中的潜伏侵染菌量与发病程度之间是否相关，腐烂病在经历冬季低中的发展

有何影响也鲜有报道。本研究建立了苹果枝皮基因组的实时定量PCR检测体系，在定

量检测样本中潜伏状态中腐烂病菌DNA和寄主的DNA的含量的同时，定义了分子病

Disease

情指数(Molecular．detected

定量指标。利用实时定量PCR检测体系对人工接种枝条和田间自然侵染枝条中的潜伏

侵染菌量进行检测，分析了MDI与发病程度之间的关系以及健康枝条经不同时间低温

处理后检出率、潜伏侵染菌量及分离率的变化。同时还研究了腐烂病在田间发生的空

间分布型和抽样调查技术。主要研究结果如下：

】．设计合成了苹果枝皮基因组的特异性引物，对引物的特异性进行了测定，建立

并优化了苹果枝皮的Real．time

PCR定量检测体系：20此体系中，引物maid3一F／

8．2

maid3．R各0．4“L，含荧光染料fl‘JMixl0gL，DNA模板1此，ddH20pL。标准曲

值。

2．在室内用腐烂病菌菌饼人二[接种一年生苹果枝条90段，在接种后5d，严透度

0

合度为0．6749，P0．000l；舀：接种后1d，发病率100％，严重度最高可达78．54％，

所乍j-样品均能用Real．timePCR扩增出腐烂病菌的DNA，MDI与接种后10d调查的

染菌餐与枝条发病严重度之间存在显著的正相关，由此能通过测定MDI值来估测腐

烂病的侵染和发病情况。

3．利用Real．timePCR对Itt问自然侵染的苹果枝条进行检测，三个试验果吲的检

jI：率分别为65．89％，97．22％，78．26％，苹果枝条样l诮Real—timePCR检测的MDI_Ij

0．0001。

J『)tfc均小T

1

4．采集15段尤症状枝条，往．50C处理不同时问后保湿，平均检出率为67．33％，

hl2hl8h24h4

愉fIi率随低温处理㈨Ⅶ佝j1『17加．。l!_J：升趋势，呈6d；不liiJ时fnJ仪

8h12h24h4d6

低濉处理的，ifi均榆㈣簪为41．00％，呈1h，均高于仅保油点处理纣l

的榆…率21．67％，总体．I．-低濉后保湿处理的检出；笨ij’矿j二仪低温处理。在检“j闲擦：‘力‘

MDI

嘶，低温处理后保泓培养fi9j两于仪低温处理。1：H时fi,J低温处理后保湿的MDl

18

随lI寸M1的延长而增』JfI，仪fLC?,．I处理lfI

h的MDl高’J．．其他时间处理。在分离；簪力砷i，

不同时问低温后保湿处理的平均分离率为65．33％，并随低温时问的延长呈上升趋势，

8h6

h=4d24h】2h，且低于仅

不同时问仅低温处理的平均分离率为15．00％，呈1

保湿处理组；Valsa

mali的平均相对分离频率相差不大，低温后保湿培养为14．97％，

随低温时间的延长呈上升趋势，仅低温处理只在低温4mali。