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蛋白质的离子交换层析技术研究进展

1.离子交换层析的原理以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。蛋白质（以静电引力为主）的离子交换层析两性分子，不同pH，所带电荷种类和数目不同高级结构，大分子，多位点吸附除静电力还有氢键、疏水作用、范德华力等

待分离的目标分子和杂质一起进入平衡后的离子交换剂，目标分子和杂质因带电量不同，与离子交换剂有不同的结合程度，通过逐渐增加盐离子浓度，将目标分子和杂质分别洗脱下来，从而实现目标分子和杂质的分离。

2.离子交换剂基本结构2.1指标2.2分类2.3

2.1离子交换剂的基本结构基质应具备的特点：机械稳定性强，适合高流速化学稳定性好，在很宽的pH范围内保持稳定，能耐去污剂、有机溶剂。球形，颗粒均匀。亲水性。高交换容量，要有较大的孔径。水不溶性基质活性基团平衡离子++平衡离子

2.2离子交换剂的指标交换容量：离子交换剂能结合溶液中可交换离子的能力，通常用有效交换容量和实际交换容量来表示。膨胀度：干态的交换剂吸水后造成体积膨胀的程度。粒径：一般都在3-300μm交联度及网孔结构：交联度越高，机械强度越好，耐压性能越好。电荷密度：基质颗粒单位表面积的取代基数量。对于蛋白质，介质的电荷密度往往较低。以免结合过牢，难以洗脱且易变性。粒径↓→分辨率↑，分离效果↑，但流速↓实际交换容量指每克干介质或每毫升湿胶包含的带电功能基团的数量有效交换容量指每克干介质或每毫升湿胶在一定的实验条件下吸附某物质的实际容量

2.3离子交换剂的分类根据活性基团的酸碱性质和解离性质：酸碱性质：解离性质：阳离子交换剂：活性基团为酸性，结合阳离子阴离子交换剂：活性基团为碱性，结合阴离子强离子交换剂：活性基团为强酸强碱弱离子交换剂：活性基团为弱酸弱碱类型名称英文符号阴离子强碱季铵基Q季铵基乙基QAE弱碱二乙氨基乙基DEAE阳离子强酸磺丙基SP磺乙基SE弱酸羧甲基CM蛋白质分离纯化时，条件必须温和，通常用弱离子交换剂

2.3离子交换剂的分类由于树脂的孔径过小，且电荷密度过高，疏水性过强使得大分子结合过牢而不易洗脱，同时，会造成变性。通常用于蛋白质的离子交换剂多为纤维素等多糖类。纤维素葡聚糖琼脂糖多糖类高效型非孔型聚乙烯醇型其它

2.3离子交换剂的分类开放性长链，较大的表面积，吸附容量最大离子基团少，排列稀疏，与蛋白质结合不太牢固，易于洗脱良好的稳定性，洗脱剂的选择范围广纤维素

2.3离子交换剂的分类目前使用交联葡聚糖主要来自Pharmacia公司，主要有4种类型，都是以SephadexG为骨架商品名分别为SephadexA-25SephadexC-25SephadexA-50SephadexC-50SephadexA-25以SephadexG，即交联葡聚糖为骨架A:阴离子C:阳离子凝胶吸水值的10倍25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克葡聚糖

2.3离子交换剂的分类123TECHNOSepharose系列SepharoseCL-6BBio-Gel系列34μm90μm200μm90μm粒径大孔珠状颗粒状Q型SP型SepharoseHP弱型（DEAE，ANXCM）强型（Q，SP）SepharoseFFQ型SP型SepharoseBBDE型CM型琼脂糖

2.3离子交换剂的分类高效型：SOURCE系列、MonoBeads系列刚性的骨架结构：高硬度、高流速亲水表面：低特异性吸附非孔型：MiniBeads系列所有的结合都发生在颗粒表面液膜扩散小，快速；颗粒小，分辨率高聚乙烯醇型：Toyopearl系列多孔型三维网状结构，富含羟基，高度亲水其它

无孔型有孔型无孔型微孔型大孔型无孔型，交换发生在表面；有孔型，需进入基质内部再发生交换

2.3离子交换剂的分类高效型：SOURCE系列、MonoBeads系列刚性的骨架结构：高硬度、高流速亲水表面：低特异性吸附非孔型：MiniBeads系列所有的结合都发生在颗粒表面液膜扩散小，快速；颗粒小，分辨率高聚乙烯醇型：Toyopearl系列多孔型三维网状结构，富含羟基，高度亲水其它

3.实验条件的确定离子交换剂3.1色谱柱3.2缓冲液3.3

3.1离子交换剂按规模：分析型分离，一般用柱色谱；大规模工业化分离，有柱色谱、膨胀床吸附、分批分离等多种模式按目的：在预处理和初分级阶段，目的是提取和浓缩目标分子；在细分级和最后的精制阶段，目的是去除杂质，获得单一组分。目标分子的大小：选择合适孔径的基质目标分子的电荷及pH稳定性：在起始缓冲液中，目标分子和介质的功能基团带相反的电荷，以利于目标分子结合在色谱柱上，起始相洗脱，杂质和介质的功能基团带相反的电荷，从而吸附在色谱柱上。这