2026版湖南版选考总复习生物学53B版专题22　基因工程 讲解册PPT.pptxVIP

;目录;考点1重组DNA技术的基本工具;“分子缝

合针”——

DNA

连接酶;“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体;考点2基因工程的基本操作程序及应用

一、DNA的粗提取;二、PCR技术;三、琼脂糖凝胶电泳;电泳

结果及

初步

分析;四、基因工程的基本操作程序

1.目的基因的筛选与获取;2.基因表达载体的构建(基因工程的核心步骤);构建基因

表达载体

过程

示意图;知识归纳????基因工程中的同尾酶

同尾酶是指识别DNA分子中不同核苷酸序列,但能切割产生相同黏性末端的限制酶,如图:

?

由同尾酶产生的黏性末端,能够通过碱基互补配对彼此连接,可用于基因表达载体的构建。;易混易错????启动子、终止子、起始密码子、终止密码子对比;3.将目的基因导入受体细胞;知识拓展????农杆菌转化法示意图

?

(1)两次重组

①第一次重组:目的基因与Ti质粒构建重组载体。②第二次重组:重组Ti质粒上的T-

DNA插入染色体DNA。

(2)两次导入

①第一次导入:将重组Ti质粒导入经Ca2+处理的农杆菌细胞。②第二次导入:将T-DNA

导入植物细胞染色体DNA上。;4.目的基因的检测与鉴定;小表达????(1)[2024河北,22(2)]利用_____________方法将r2HN基因导入水稻愈伤组织。为

检测r2HN表达情况,可通过PCR技术检测_______________,通过_______________技术检

测是否翻译出r2HN蛋白。

(2)[2023海南,20(3)]农杆菌侵染植物细胞时,可将外源基因递送到植物细胞中的原因是

____________________________________________________________________________

________________________。;知识拓展????标签蛋白;五、基因工程的应用;考点3蛋白质工程;高考试题在这一板块中,重视考查基因工程的“工具”(如限制酶、DNA连接酶等)的作用与选择、PCR技术的原理与操作、基因工程的操作、基因工程的应用等。;一基因工程“工具”的种类、作用与选择依据

1.限制酶的种类和选择依据

限制酶(限制性内切核酸酶)主要来自原核生物,其通过识别双链DNA上特定核苷酸序

列后,使特定部位的磷酸二酯键水解,DNA断裂。根据功能和特性的不同可将限制酶分

为三类,见表。;通常,使用单一的限制酶切割目的基因和载体时,会使被切割DNA两端产生完全相同的单链突出端,在连接过程中,任何相同的突出端在DNA连接酶的催化下均可发生连接,

除可产生质粒载体的自身连接,也可产生质粒载体与目的基因的连接,但质粒载体与目

的基因的连接也可能发生在二者的任何突出端,即二者连接无确定的方向,进而增加目

的基因插入载体的方向上的错误率,这些都会降低目的基因插入质粒载体的准确率。

因此,在无特殊原因情况下,通常不选择使用单酶切方法实现目的基因插入质粒载体。

相比之下,双酶切会使DNA两端产生序列不同的突出端,根据碱基互补配对原则,目的

基因两端会与质粒两端分别识别配对,进而将目的基因按设定方向插入质粒载体。;核心好题;解析思路引导????目的基因应插入质粒中启动子和终止子之间,因此不能考虑BamHⅠ、

HindⅢ和PstⅠ这三种限制酶,另外,KpnⅠ酶切位点除启动子和终止子之间存在,复制原

点附近也存在,因此不能考虑。综合分析,需选用PvuⅡ和EcoRⅠ两种限制酶进行切割。;核心好题;解析思路引导????本题结合DNA双链的结构特点、转录的特点等内容,考查基因工程中

构建重组表达载体时限制酶的选择。题干指出,C1酶基因以B链为转录模板链,转录时

mRNA自身的延伸方向为5→3,转录时从B链的3端开始(如解析图),结合质粒上启动子

的位置分析,B链3端应该用BamHⅠ进行切割,而其5端应该用SmaⅠ进行切割。

?;2.DNA连接酶的种类和选择依据

常用的DNA连接酶主要有E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。E.coliDNA连接酶和

T4DNA连接酶都可以连接具有黏性末端和平末端的DNA片段,但E.coliDNA连接酶连

接具有平末端的DNA片段的效率要远低于T4DNA连接酶(2024新版人教版教材)。;核心好题;下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是?????()

A.质粒和目的基因都用酶3切割,用E.coliDNA连接酶连接

B.质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割,用T4DNA连接酶连接

C.质粒和目的基因都用酶1和酶2切割,用T4DNA连接酶连接

D.质粒和目的基因都用酶2和酶4切割,用E.coliDNA连接酶连接;解析思路引导?