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演讲人：
日期:
色谱分离方法原理与技术
CATALOGUE
目录
01
色谱法基础理论
02
常用色谱类型
03
仪器系统组成
04
实验参数优化
05
应用领域分析
06
前沿技术进展
01
色谱法基础理论
分离机制与原理
吸附与分配作用
色谱分离的核心机制包括吸附色谱（固定相为固体吸附剂）和分配色谱（固定相为液体），组分通过在两相间反复分配实现分离，分配系数差异决定分离效果。
离子交换与分子筛效应
离子交换色谱利用固定相带电基团与样品离子的静电作用分离；分子排阻色谱则基于分子大小差异，大分子无法进入固定相孔隙而先流出。
亲和色谱特异性结合
通过生物特异性相互作用（如抗原-抗体、酶-底物）实现高选择性分离，常用于蛋白质纯化。
手性分离机制
手性固定相或手性添加剂与对映体形成非对映体复合物，利用立体结构差异实现拆分。
保留值与选择性
保留时间反映组分在色谱柱中的滞留程度，容量因子（k）量化保留强弱，k=(t_R-t_0)/t_0，其中t_R为组分保留时间，t_0为死时间。
保留时间与容量因子
α=k_2/k_1，表征两组分的选择性差异，α1是分离的前提条件，优化流动相组成或固定相可调节α值。
相对保留值（α）
升高温度通常缩短保留时间，超临界流体色谱中压力变化显著改变流体密度，从而调控溶解度和选择性。
温度与压力影响
通过衍生化反应改变组分极性或引入荧光基团，提升检测灵敏度与分离度。
化学修饰增强选择性
理论塔板数（N）
范第姆特方程
N=16(t_R/W)^2，衡量柱效指标，塔板数越高表明色谱峰越窄，分离效率越高，与柱长、填料粒径正相关。
H=A+B/u+Cu，描述理论塔板高度（H）与流速（u）的关系，A为涡流扩散项，B为纵向扩散项，C为传质阻力项，优化流速可最小化H。
塔板理论与速率理论
粒径与柱效关系
减小固定相粒径（如HPLC使用3-5μm填料）可降低A项和C项，显著提高柱效，但需更高操作压力。
温度对动力学影响
升高温度降低流动相黏度，加速传质过程，减少C项贡献，但可能影响固定相稳定性和选择性。
02
常用色谱类型
高效液相色谱(HPLC)
分离原理
基于样品组分在流动相（液体）和固定相（色谱柱填料）之间的分配系数差异实现分离，通过高压泵推动流动相提高分离效率。
应用领域
广泛应用于药物分析（如纯度检测、代谢产物研究）、食品安全（添加剂检测）、环境监测（污染物分析）及生物大分子（蛋白质、核酸）分离纯化。
技术特点
具有高分辨率、高灵敏度、可自动化操作的优势，配备紫外、荧光或质谱检测器可实现对复杂混合物的定性和定量分析。
方法开发
需优化流动相组成（如甲醇/水比例）、色谱柱类型（C18、离子交换等）、流速及温度等参数，以适应不同极性化合物的分离需求。
气相色谱(GC)
分离原理
利用样品组分在惰性气体流动相和固定相（毛细管柱涂层）中的挥发性和吸附性差异进行分离，高温条件下汽化样品以提高分离速度。
应用领域
适用于挥发性有机物（VOCs）分析，如石油化工产品、香料成分、环境污染物（如苯系物）及临床毒理学中的药物检测。
技术特点
配备火焰离子化检测器（FID）或质谱联用（GC-MS），可实现ppm级甚至ppb级的痕量分析，但对热不稳定或难挥发化合物不适用。
操作条件
需精确控制载气流速、程序升温速率（如50°C至300°C梯度升温）和进样口温度，以确保峰形对称性和分离度。
2014
薄层色谱(TLC)
04
01
02
03
分离原理
通过毛细作用使样品在涂有吸附剂（如硅胶、氧化铝）的薄层板上展开，组分因吸附力差异形成不同迁移距离的斑点。
应用领域
常用于天然产物提取物的快速筛查（如中药成分初步鉴定）、化学反应监控（如TLC跟踪合成进程）及食品色素检测等低成本分析场景。
技术特点
操作简便、成本低廉，可通过显色剂（如碘蒸气、紫外灯）可视化斑点，但分辨率和重现性低于HPLC或GC。
实验优化
需选择合适展开剂（如乙酸乙酯/正己烷混合体系）、薄层板活度（如105°C活化30分钟）及点样量（通常1-5μL）以提高分离效果。
03
仪器系统组成
进样装置与样品处理
自动进样器与手动进样技术
自动进样器通过高精度注射泵和程序控制实现样品定量引入，减少人为误差；手动进样需严格规范操作步骤，确保进样体积的准确性。
样品前处理方法
包括固相萃取（SPE）、液液萃取（LLE）及衍生化技术，用于去除基质干扰、富集目标物或改善色谱行为，提高分析灵敏度与选择性。
进样模式选择
分流/不分流进样（GC）、直接进样与阀切换（HPLC）等，需根据样品性质、浓度及分离目标优化参数，避免柱超载或峰形畸变。
分离柱与固定相
基于疏水相互作用分离非极性至中等极性化合物，固定相键合密度与孔径影响保留时间和分离效率。
反相色谱柱（C18、C8等）
通过带电固定相
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