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生物公司工艺培训大纲

演讲人：XXX

01

工艺基础理论

02

核心生产流程

03

设备操作规范

04

质量控制体系

05

安全与合规要求

06

文件与记录管理

01

工艺基础理论

微生物生长曲线分析

微生物培养过程可分为迟缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期，掌握各阶段特征对优化培养条件至关重要，需通过OD值、pH、溶氧等参数实时监测。

环境参数控制

精确调控温度（±0.5℃）、pH（±0.1）、溶氧（DO≥30%）等参数，避免代谢副产物积累，如大肠杆菌培养需严格控制乙酸生成。

灭菌与无菌操作

采用121℃高压蒸汽灭菌20分钟确保培养基无菌，层流超净工作台操作需遵循ISO5级洁净标准，防止外源微生物污染。

培养基设计与优化

根据不同微生物的营养需求，设计碳源、氮源、无机盐及生长因子的配比，并通过正交实验或响应面法优化培养基成分以提高菌体密度或产物产量。

微生物培养原理

生物反应器动力学

质量传递与混合特性

分析搅拌桨类型（如Rushton桨、斜叶桨）对氧传质系数（kLa）的影响，通过计算雷诺数（Re10^4）确保反应器内充分混合。

规模放大准则

基于恒定kLa、单位体积功率输入（P/V）或剪切力相似性原则进行反应器放大，需建立计算流体力学（CFD）模型预测混合效果。

过程参数耦合控制

采用PID算法联动调节搅拌转速（50-1000rpm）、通气量（0.5-2vvm）和背压（0.1-0.3MPa），维持DO在设定阈值。

在线监测系统集成

通过PAT技术整合pH电极、溶氧探头、尾气分析仪（如CO2/O2），实现代谢通量的实时计算与反馈控制。

代谢途径与产物合成

中心碳代谢调控

通过13C标记实验绘制代谢流分布图，识别限速步骤（如TCA循环α-酮戊二酸节点），过表达关键酶（如GDH）提升前体供应。

次级代谢产物合成

分析聚酮化合物（如红霉素）模块化合成机制，通过启动子工程优化PKS基因簇表达时序，结合前体喂养（丙酸/甲基丙二酸）提高效价。

胁迫响应与产物分泌

研究渗透压（如0.5MNaCl）、氧化应激（H2O2诱导）对次级代谢的激活作用，改造ABC转运蛋白（如CcmA）促进胞外分泌。

合成生物学工具应用

设计CRISPRi系统动态抑制竞争途径（如乳酸合成），构建代谢开关（温度敏感型启动子）实现生长与生产阶段分离。

02

核心生产流程

细胞系选择与优化

根据目标产物特性筛选高表达、稳定性强的细胞系，通过基因编辑或适应性培养提升细胞性能，确保规模化生产的可行性。

培养基配方设计

开发无血清或化学成分限定的培养基，精确调控营养物质比例（如葡萄糖、氨基酸、生长因子），兼顾细胞生长密度与产物表达效率。

生物反应器参数控制

实时监测溶氧、pH、温度等关键参数，采用灌注或分批补料策略维持细胞代谢稳态，避免乳酸/氨等副产物积累抑制扩增。

污染防控体系

建立严格的灭菌程序（如在线过滤、蒸汽灭菌）和环境监测（微粒/微生物检测），防止支原体、病毒等外源因子污染。

细胞培养与扩增

通过斜面培养、种子罐逐级扩增确保菌种活力，优化接种量和时机以缩短发酵延迟期，提高生产周期效率。

依据菌体耗氧速率动态调整搅拌转速与通气量，避免溶氧不足导致代谢转向或泡沫过多影响发酵稳定性。

采用指数流加或反馈控制补料，精准供给碳源/氮源维持菌体比生长速率，平衡生物量与产物合成的关系。

通过pH调节、渗透压控制或添加前体物质减少乙酸、乙醇等抑制性代谢物积累，延长产物高产期。

发酵工艺控制要点

菌种活化与接种策略

溶氧与搅拌协同调控

补料分批工艺优化

代谢副产物抑制解除

下游分离纯化技术

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初级捕获技术

运用离心、深层过滤或切向流过滤快速去除细胞碎片，结合膨胀床吸附实现产物的初步浓缩与杂质去除。

设计多步层析组合（如亲和-离子交换-疏水层析），依据产物特性选择特异性配基或洗脱条件，有效分离宿主蛋白与聚合物。

层析纯化策略

病毒清除验证

采用纳米过滤、低pH孵育或溶剂/去污剂处理灭活潜在病毒，确保符合法规对生物制品安全性的严格要求。

制剂工艺开发

优化缓冲液配方、冻干曲线或稳定剂添加，解决产物在浓缩、储存过程中的聚集或降解问题，保障终产品稳定性。

03

设备操作规范

生物反应器操作流程

操作前需检查反应器密封性、搅拌系统及传感器状态，根据工艺需求设定温度、pH值、溶氧量等关键参数，确保与生产批次记录一致。

设备预检与参数设置

严格按无菌操作规范转移培养基，控制接种量并记录细胞密度，避免污染或接种不均导致培养失败。

培养结束后按标准程序灭活细胞，排空反应器并使用专用清洗剂循环冲洗，防止残留物影响下一批次生产。

培养基装载与接种

实时监测生物反应器内代谢物浓度、细胞生长曲线及溶氧变化，每小时记录数据并分析异常波动，及时调整补料策略。

过程监控与数据记录

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