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PCR技术试卷及答案

考试时间：______分钟总分：______分姓名：______

一、选择题（本大题共10小题，每小题2分，共20分。在每小题列出的四个选项中，只有一个是符合题目要求的，请将正确选项字母填在题后的括号内。）

1.PCR技术的核心酶是（）。

A.DNA聚合酶I

B.DNA聚合酶III

C.胶体DNA酶

D.TaqDNA聚合酶

2.PCR反应体系中，引物的作用是（）。

A.催化DNA合成

B.提供3-OH末端供延伸延伸提供

C.模板链

D.补充缺失的核苷酸

3.PCR过程中，变性步骤的主要目的是（）。

A.合成新的DNA链

B.使DNA双链解开成单链

C.引物与模板结合

D.合成引物

4.下列哪种PCR技术能够在一次反应中检测多个靶标序列？（）

A.常规PCR

B.巢式PCR

C.多重PCR

D.实时荧光定量PCR

5.PCR产物大小通常通过哪种方法进行鉴定？（）

A.测序

B.电子显微镜观察

C.凝胶电泳

D.分光光度法测定

6.下列哪种情况可能导致PCR出现非特异性扩增？（）

A.引物设计不合理

B.循环次数太少

C.dNTPs浓度过低

D.Taq酶活性过高

7.与常规PCR相比，实时荧光定量PCR（qPCR）的主要优势在于（）。

A.产物特异性更高

B.可以检测多种靶标

C.可以定量检测起始模板量

D.操作步骤更简单

8.在进行逆转录PCR（RT-PCR）实验时，首先需要进行的是（）。

A.RNA变性

B.合成cDNA第一链

C.合成cDNA第二链

D.PCR扩增

9.PCR实验中，镁离子（Mg2?）浓度对反应的影响是（）。

A.提高引物二聚体形成

B.降低Taq酶活性

C.影响dNTPs的供体

D.以上都是

10.PCR技术的基本反应体系通常不包含（）。

A.模板DNA

B.引物

C.RNA酶

D.dNTPs

二、填空题（本大题共5小题，每空1分，共15分。请将答案填写在横线上。）

1.PCR的全称是__________，其基本反应原理是__________。

2.PCR反应一般包括三个主要步骤：__________、__________和__________。

3.设计PCR引物时，通常需要考虑引物的长度、GC含量、__________、__________等因素。

4.实时荧光定量PCR（qPCR）中，常用的荧光报告分子有__________和__________两种类型。

5.为了避免PCR实验过程中的污染，实验室通常需要采取__________、__________和__________等措施。

三、名词解释（本大题共4小题，每小题3分，共12分。请将答案写在横线上。）

1.引物（Primer）

2.变性（Denaturation）

3.巢式PCR（NestedPCR）

4.数字PCR（DigitalPCR）

四、简答题（本大题共3小题，每小题5分，共15分。请将答案写在横线上。）

1.简述PCR技术的基本原理。

2.影响PCR反应效率的主要因素有哪些？

3.简述PCR技术在医学诊断中的应用。

五、论述题（本大题共1小题，共18分。请将答案写在横线上。）

PCR实验中常见的非特异性扩增有哪些？分析其原因，并提出相应的解决方法。

试卷答案

一、选择题（每小题2分，共20分）

1.D

2.B

3.B

4.C

5.C

6.A

7.C

8.B

9.D

10.C

二、填空题（每空1分，共15分）

1.聚合酶链式反应；DNA双链复制

2.变性；退火；延伸

3.退火温度；特异性

4.探针；荧光染料

5.环境控制；操作规范；个人防护

三、名词解释（每小题3分，共12分）

1.引物：一段短的、单链的DNA或RNA序列，能与模板DNA的特定序列互补结合，为DNA聚合酶提供起始合成的3-OH末端。

2.变性：在高温条件下，DNA双链氢键断裂，使DNA分子解离成两条互补的单链的过程。

3.巢式PCR：在常规PCR基础上，利用第一轮PCR产物作为模板，再使用两对引物进行第二轮PCR的技术，能显著提高PCR的特异性，减少非特异性产物。

4.数字P