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（一）操作步骤：
1.将胶板放在胶槽中，保持水平。
2.称取0.12g（8%）琼脂糖至锥形瓶中，加入15mlTAE，微波炉加热至全部溶解。
3.等凝胶温度降至50-60℃，加入溴化乙锭（1mg/l）至终浓度0.5μg/ml,摇匀后快速倒入
胶板中，除去气泡梳子。
4.待胶凝固后（室温30-45min，至少20min）轻轻拔出梳子，将胶放入电泳槽中，添补电
泳缓冲液TAE至大约高出凝胶1mm。
5，将电泳样品与6×loadingbuffer适量混合点入连接好电极，选择适当电压（不大
于5V/cm）开始电泳。
6.根据溴酚蓝位置适时停止电泳，紫外光下观察。
（二）注意事项：
1.EB是一种强诱变剂（可能造成遗传性危害），直接接触有中等毒性。EB可以通过皮肤吸
收，因此应当避免一切与EB的直接接触。EB对皮肤，眼睛，口腔和上呼吸道系统有刺激
性作用。应将EB安全密封，并密闭存放于干燥避光处。
如果ＥＢ不慎落入眼睛，立即用大量的冷水冲洗至少15分钟。能用洗眼进行擦洗；
如果皮肤不慎接触到ＥＢ，立即脱去被污染的衣物。再用肥皂接触到的皮肤后，大量的
冷水冲洗至少15分钟。
2.融胶时随着融化次数的增加，水分丢失也越多，凝胶浓度则会越来越高，导致实验结果
不稳定，可适量添加缓冲液的量。
（三）实验原理及遇到问题：
1.原理：使用琼脂糖凝胶作为电泳支持介质，发挥分子筛功能，使得大小和构象不同的核
酸分子的迁移率出现较大差异，分子的迁移速度与其相对分子量成反比，从而达到分离
的目的。分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
2.琼脂糖凝胶电泳时加样侧应位于负.
3.EB的作用：溴化乙锭是一种荧光，它可以嵌入分子中并在紫外照射下发出橙
红色荧光，这种与分子的结合几乎没有碱基序列的特异性。
4.琼脂糖浓度与（线状）分离范围：0.9%的凝胶可分离0.5-7kb的分子；1.2%
的凝胶可分离0.4-6kb的分子；1.5%的凝胶可分离0.2-3kb的分子
5.当电压增大时琼脂糖凝胶分离的有效范围反而缩小，所以根据实验需要也可作适当调整
(1)Operationsteps:
1.cetheglueboardinthegluetankandkeepitlevel.2.Weigh0.12g(8%)agaroseintoanErlenmeyerflask,add
15mlTAE,andheatinthemicrowaveuntilcompletelydissolved.3.Waitforthegeltemperaturetodropto50-60°C,
addethidiumbromide(1mg/l)toafinalconcentrationof0.5μg/ml,shakewellandquicklypouritintothegelte,
removeairbubbandinsertacomb.4.Afterthegelsolidifies(30-45minutesatroomtemperature,atleast20
minutes),gentlypulloutthecomb,putthegelintotheelectrophoresistank,andaddelectrophoresisbufferTAEto
about1mmabovethegel.5.Mixanappropriateamountoftheelectrophoresissampleand6×loadingbuffer
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