第三章细胞生物学研.pptVIP

27AP:appressoriumIS:infectionsacSH:subcuticularhyphaeV.nashicolainfectionbehaviorinpectinlayersin

scab-inoculatedleaves3/4/12细胞生物学-研究方法第27页，共51页，星期日，2025年，2月5日315.扫描电镜技术（scanningelectronmicroscope，SEM）扫描电镜的电子枪发射出的电子束被电磁透镜汇聚成极细的电子“探针”，在样品表面进行“扫描”，电子束可激发样品表面放出二次电子（同时也有一些其他信号）。二次电子产生的多少与样品表面的形貌有关。二次电子由探测器收集，并在那里被闪烁器转变成光信号，再经光电倍增管和放大器又转变成电压信号来控制荧光屏上电子束的强度。这样，样品不同部位上产生二次电子多或少的差异，直接反映在荧光屏相应部位亮或暗的差别，从而得到一幅放大的立体感很强的图像（图3－10）。3/4/12细胞生物学-研究方法第28页，共51页，星期日，2025年，2月5日323/4/12细胞生物学-研究方法第29页，共51页，星期日，2025年，2月5日333/4/12细胞生物学-研究方法第30页，共51页，星期日，2025年，2月5日35第二节细胞组分的分析方法一、用超速离心技术分离细胞器与生物大分子及其复合物二、细胞内核酸、蛋白质、酶、糖类与脂质等的显示方法三、特异蛋白抗原的定位与定性四、细胞内特异核酸序列的定位与定性五、利用放射性标记技术研究生物大分子在细胞内的合成动态六、定量细胞化学分析技术3/4/12细胞生物学-研究方法第31页，共51页，星期日，2025年，2月5日36一、用超速离心技术分离细胞器与生物大分子及其复合物用低渗、超声破碎或研磨等方法可使细胞膜破损，形成细胞核、线粒体、叶绿体、内质网、高尔基体、溶酶体等细胞器和细胞组分的混合匀浆。差速离心（differentia1centrifugation），即利用不同的离心速度所产生的不同离心力，将各种亚细胞组分和各种颗粒分开。3/4/12细胞生物学-研究方法第32页，共51页，星期日，2025年，2月5日37密度梯度离心是将要分离的细胞组分小心地铺放在含有密度逐渐增加的、形成密度梯度的、高溶解性的惰性物质（如蔗糖）溶液的表面。在这种条件下进行离心，不同组分以不同的沉降速率沉降，形成不同的沉降带。各颗粒、组分的沉降速率与它们的形状和大小有关，通常以沉降系数（S值）表示。差速离心与密度梯度离心相结合可以达到更精细的分离（图3－11）。3/4/12细胞生物学-研究方法第33页，共51页，星期日，2025年，2月5日38二、细胞内核酸、蛋白质、酶、糖类与脂质等的显示方法(细胞化学的显示方法)利用一些显色剂与被检测物质中一些特殊基团特异性结合的特征，通过显色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来判断某种物质在细胞中的分布和含量。例如福尔根（Feulgen）反应可以特异显示DNA的分布;PAS反应则可确定多糖的存在;四氧化锇与不饱和脂肪酸反应呈黑色，苏丹III可使脂滴着色（深红色）。四氧化锇和苏丹III可以证明脂肪滴的存在。3/4/12细胞生物学-研究方法第34页，共51页，星期日，2025年，2月5日39米伦（Millon）反应中，氮汞试剂与组织中的蛋白质侧链上的酪氨酸残基反应，形成红色沉淀。AgNO3可特异地显示rDNA的存在；在进行细胞中某种酶的定性研究时，由于大多数固定剂对酶都有钝化作用，样品制备或采用冷冻切片，或以冷丙酮、甲醛进行短期固定，以尽量保持酶的活性.3/4/12细胞生物学-研究方法第35页，共51页，星期日，2025年，2月5日403/4/12细胞生物学-研究方法第36页，共51页，星期日，2025年，2月5日第三章细胞生物学研第1页，共51页，星期日，2025年，2月5日2第一节细胞形态结构的观察方法一、光学显微镜技术二、电子显微镜技术三、扫描隧道显微镜3/4/12细胞生物学-研究方法第2页，共51页，星期日，2025年，2月5日3一、光学显微镜技术3/4/12细胞生物学-研究方法第3页，共51页，星期日，2025年，2月5日4①光学放大系统，为两组玻璃透镜：目镜与物镜；②照明系统：光源、折光镜和聚光镜，有时另加各种滤光片以控制光的波长范围；③机械和支架系统，主要是保证光学系统的准确配制和灵活调控;对任何显微镜来说，最重要的性能