再生医学 Western blot 工程师岗位考试试卷及答案.docVIP

再生医学Westernblot工程师岗位考试试卷及答案

一、单项选择题（每题2分，共20分）

1.Westernblot中封闭液的主要作用是（）

A.固定蛋白B.防止非特异性结合C.清洗膜D.显色

2.转膜时常用的膜是（）

A.滤纸B.PVDF膜C.保鲜膜D.玻璃纤维膜

3.以下哪种是常用的蛋白上样缓冲液成分（）

A.乙醇B.甘油C.丙酮D.乙酸

4.一抗的作用是（）

A.结合二抗B.结合目的蛋白C.显色D.封闭

5.二抗的标记物通常是（）

A.核酸B.多糖C.酶或荧光基团D.脂质

6.蛋白样品在进行SDS前需要进行（）处理

A.离心B.超声C.变性D.过滤

7.SDS中SDS的作用是（）

A.分离蛋白B.使蛋白带负电C.染色D.固定蛋白

8.显色底物DAB用于（）标记的二抗显色

A.碱性磷酸酶B.辣根过氧化物酶C.荧光素D.生物素

9.预染Marker的作用是（）

A.指示蛋白条带位置B.固定蛋白C.封闭D.显色

10.Westernblot实验中，通常用（）检测蛋白表达量变化

A.灰度值分析B.重量分析C.体积分析D.密度分析

答案：1.B2.B3.B4.B5.C6.C7.B8.B9.A10.A

二、多项选择题（每题2分，共20分）

1.Westernblot实验包括以下哪些步骤（）

A.蛋白提取B.SDSC.转膜D.封闭E.一抗二抗孵育

2.蛋白提取过程中可能用到的试剂有（）

A.裂解液B.蛋白酶抑制剂C.核酸酶D.乙醇E.甘油

3.影响转膜效率的因素有（）

A.电流大小B.转膜时间C.膜的类型D.蛋白分子量E.缓冲液组成

4.封闭液的种类有（）

A.脱脂奶粉B.BSAC.明胶D.蔗糖E.聚乙烯醇

5.选择一抗时需要考虑的因素有（）

A.种属来源B.特异性C.效价D.标记类型E.价格

6.以下哪些可能导致Westernblot背景过高（）

A.封闭不充分B.一抗浓度过高C.二抗非特异性结合D.洗膜不充分E.转膜不完全

7.SDS中浓缩胶和分离胶的区别在于（）

A.浓度不同B.pH不同C.交联度不同D.成分不同E.作用不同

8.显色方法有（）

A.化学发光法B.比色法C.荧光法D.放射性自显影E.酶标法

9.处理蛋白样品时，常用的破碎细胞方法有（）

A.超声破碎B.研磨C.冻融D.酶解法E.渗透压法

10.实验中可能用到的仪器有（）

A.离心机B.电泳仪C.转膜仪D.摇床E.成像系统

答案：1.ABCDE2.ABC3.ABCDE4.ABC5.ABCD6.ABCD7.ABE8.ABC9.ABCDE10.ABCDE

三、判断题（每题2分，共20分）

1.Westernblot只能检测一种蛋白。（）

2.转膜时，蛋白从凝胶转移到膜上是靠电场力。（）

3.一抗可以直接用清水稀释。（）

4.封闭时间越长越好。（）

5.不同厂家的二抗可以通用。（）

6.SDS中蛋白分子量越大，迁移速度越快。（）

7.化学发光法比比色法灵敏度低。（）

8.蛋白提取后可以长期保存于常温。（）

9.实验中使用的抗体都需要进行效价测定。（）

10.成像系统可以直接检测到化学发光信号。（）

答案：1.×2.√3.×4.×5.×6.×7.×8.×9.√10.√

四、简答题（每题5分，共20分）

1.简述Westernblot实验中封闭的目的。

答案：封闭的目的是防止一抗和二抗与膜上的非特异性位点结合。膜在转膜后，其表面存在很多可与抗体结合的位点，若不封闭，抗体就会非特异性结合这些位点，导致背景过高，干扰对目的蛋白条带的观察与分析，封闭后可提高检测的特异性。

2.说明SDS分离蛋白的原理。

答案：SDS即十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。SDS能使蛋白质变性并带上大量负电荷，消除蛋白原有电荷差异。在电场作用下，蛋白在聚丙烯酰胺凝胶的分子筛中泳动，分子量小的蛋白更容易通过凝胶孔隙，迁移速度快；分子量大的蛋白迁移慢，从而实现蛋白按分子量大小分离。

3.转膜不充分会对实验结果产生什么影响？

答案：转膜不充分会导致凝胶上仍残留较多目的蛋白，使得转移到膜上的蛋白量不足。在后续一抗、二抗孵育及显色过程中，膜上可结合抗体的目的蛋白少，显色条带可能很淡甚至无条带显示，无法准确分析目的蛋白的表达情况，影响实验结果的准确性与可靠性。

4.如何选择合适的一抗？

答案：首先考虑种属来源，要与样本种属匹配，避免交叉反应。其次关注特异性，确保能准确识别目的蛋白。还要考虑效价，高效价抗体可保证检测灵敏度。另外，根据实验需求选择标记类型，如荧光标记、酶标记等。同时参考抗体的口碑、品牌及价格等因素。

五、讨论题（每题5分，共20分）

1.在Westernblot实验中，如果出现多条非特异性条带，可能的原因有哪些及如何解决？

答案：原因可能有：封闭不充分，一抗特异性差、浓度过高，二抗与一抗不