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再生医学Westernblot技术员岗位考试试卷及答案
一、单项选择题（每题2分，共10题，20分）
1.Westernblot中封闭的目的是（）
A.增强抗体结合B.减少非特异性结合C.提高蛋白活性D.标记蛋白
答案：B
2.转膜时常用的膜是（）
A.滤纸B.醋酸纤维素膜C.PVDF膜D.玻璃纤维膜
答案：C
3.用于检测蛋白条带的化学发光底物是（）
A.DABB.鲁米诺C.伊红D.苏木精
答案：B
4.蛋白质样品在进行SDS前需要进行（）处理。
A.离心B.加热变性C.透析D.超滤
答案：B
5.SDS在SDS中的作用是（）
A.分离蛋白B.使蛋白带上负电荷C.调节pHD.稳定缓冲液
答案：B
6.一抗孵育的温度通常是（）
A.4℃B.37℃C.25℃D.60℃
答案：A
7.考马斯亮蓝染色的作用是（）
A.检测核酸B.检测蛋白C.检测多糖D.检测脂肪
答案：B
8.通常用于配制分离胶的试剂是（）
A.丙烯酰胺B.甲叉双丙烯酰胺C.A和BD.过硫酸铵
答案：C
9.Westernblot实验中，加样顺序是（）
A.蛋白marker、样品B.样品、蛋白markerC.随意D.先加缓冲液
答案：A
10.封闭液中常用的成分是（）
A.BSAB.葡萄糖C.氯化钠D.乙醇
答案：A
二、多项选择题（每题2分，共10题，20分）
1.Westernblot实验中需要用到的仪器有（）
A.电泳仪B.转膜仪C.成像系统D.离心机
答案：ABCD
2.以下哪些是影响Westernblot结果的因素（）
A.抗体质量B.蛋白上样量C.转膜效率D.封闭时间
答案：ABCD
3.转膜过程中可能出现的问题有（）
A.转膜不完全B.膜上有气泡C.电流过大D.缓冲液渗漏
答案：ABCD
4.用于蛋白上样缓冲液的成分有（）
A.SDSB.甘油C.溴酚蓝D.DTT
答案：ABCD
5.选择一抗时需要考虑的因素有（）
A.种属来源B.特异性C.效价D.克隆性
答案：ABCD
6.二抗选择需要注意（）
A.与一抗种属匹配B.标记物C.浓度D.保存条件
答案：ABC
7.蛋白质样品制备过程中可能用到的方法有（）
A.超声破碎B.研磨C.化学裂解D.离心
答案：ABC
8.SDS胶的组成成分包括（）
A.分离胶B.浓缩胶C.缓冲液D.催化剂
答案：ABCD
9.显色方法有（）
A.化学发光法B.底物显色法C.荧光法D.放射性标记法
答案：ABC
10.Westernblot实验中的对照有（）
A.阳性对照B.阴性对照C.空白对照D.内参对照
答案：ABD
三、判断题（每题2分，共10题，20分）
1.Westernblot可以检测蛋白质的表达量和分子量。（）
答案：对
2.转膜时间越长越好。（）
答案：错
3.一抗可以反复使用。（）
答案：对
4.SDS只能分离蛋白质。（）
答案：错
5.封闭时间过短会导致非特异性条带增多。（）
答案：对
6.化学发光检测比底物显色检测更灵敏。（）
答案：对
7.蛋白样品可以长期保存在室温。（）
答案：错
8.二抗的浓度对结果没有影响。（）
答案：错
9.考马斯亮蓝染色可以区分不同的蛋白质。（）
答案：错
10.Westernblot实验中不需要考虑实验环境。（）
答案：错
四、简答题（每题5分，共4题，20分）
1.简述Westernblot的基本原理。
答案：利用SDS分离不同分子量蛋白质，通过转膜将凝胶上的蛋白转移到固相膜上，用封闭液封闭膜上非特异性结合位点，依次与一抗、二抗孵育，二抗标记物与底物反应显色，根据条带位置和强度分析蛋白分子量和表达量。
2.转膜过程中需要注意哪些问题？
答案：要注意膜与凝胶的贴合，避免有气泡；控制好转膜电流和时间，电流过大易发热影响转膜效果，时间不足则转膜不完全；缓冲液要足量且成分正确；转膜装置要安装正确，防止短路。
3.如何选择合适的一抗？
答案：首先考虑种属来源，确保与待检测样本匹配；关注抗体特异性，保证能准确识别目标蛋白；查看效价，选择效价高的抗体以保证检测灵敏度；还需留意克隆性，单克隆抗体特异性强，多克隆抗体亲和力高，根据需求选择。
4.简述SDS在SDS中的作用。
答案：SDS即十二烷基硫酸钠，能与蛋白质结合，使蛋白质带上大量负电荷，掩盖其原本电荷性质，消除电荷差异对蛋白质迁移率的影响，使蛋白质在电场中仅依据分子量大小进行分离，从而实现对不同分子量蛋白质的有效分离。
五、讨论题（每题5分，共4题，20分）
1.若Westernblot结果出现杂带过多，可能的原因有哪些及如何解决？
答案：原因可能是封闭不充分，可延长封闭时间或更换封闭液；抗体浓度过高或特异性差，需调整抗体浓度或更换抗体；样本处理不当，有蛋白降解，要优化样本制备流程，加蛋白酶抑制剂。解决时应逐一排查，重新实验验证。
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