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检验科病原体快速检测常规操作规程

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目录

01

操作前准备

02

标本接收与处理

03

快速检测方法实施

04

结果分析与确认

05

质量管理与质控

06

文档记录与报告

01

操作前准备

设备仪器检查校准

维护记录核查

检查设备维护档案，确认已按计划完成定期保养（如滤网更换、液路清洁），并核对校准证书的有效期。

环境参数监测

确保实验室温湿度、洁净度符合检测要求，定期校准环境监测设备（如温湿度计、压差计），避免环境波动影响检测结果。

设备功能验证

对所有检测仪器进行开机自检，确认电源、温控系统、光学模块等核心组件运行正常，并记录设备状态日志。校准需参照制造商提供的标准流程，使用标准品验证检测精度和重复性。

检查试剂外包装完整性，确认冷藏试剂（如酶制剂、抗体）储存温度符合说明书要求，避光保存的试剂需检查遮光措施是否到位。

试剂保存与配制验证

试剂储存条件核查

严格按照试剂说明书配制工作液，使用经校准的移液器和量具，记录配制批次、浓度及有效期。配制后需进行性能验证（如阳性对照测试）。

配制流程标准化

分区存放不同批号试剂，使用无菌无酶耗材分装，避免反复冻融。对易降解试剂（如荧光探针）需现配现用并记录开瓶时间。

交叉污染防控

分级防护执行

佩戴防护口罩后需进行负压测试（双手捂住口罩快速呼气检查漏气），防护服袖口需覆盖手套边缘并用胶带固定。

气密性检查

消毒流程前置

穿戴防护装备前需用酒精消毒双手，检查装备无破损后方可进入实验区。护目镜需防雾处理以避免操作时视线模糊。

根据病原体风险等级选择防护装备（如BSL-2实验室需穿戴N95口罩、护目镜、连体防护服），确保无皮肤暴露。穿戴顺序遵循“由洁到污”原则（先戴帽子后穿鞋套）。

个人防护装备穿戴规范

02

标本接收与处理

电子系统录入

通过LIS系统扫描条形码关联标本信息，自动生成接收时间戳并触发后续检测流程的电子化追踪。

双人核对机制

接收标本时需由两名工作人员同步核对患者姓名、唯一标识号及检测项目，确保信息与申请单完全一致，避免样本混淆或数据录入错误。

完整性检查

评估标本容器密封性、标签清晰度及标本量是否符合检测要求，对破损、泄漏或量不足的标本需登记并反馈临床重新采集。

标本标识与信息核对

标本预处理标准化流程

离心参数统一化

严格执行离心力（如3000×g）与时间（10分钟）标准，分离血清/血浆时避免溶血或纤维蛋白残留，确保上清液澄清度达标。

核酸保护剂添加

对需分子检测的标本立即加入RNA/DNA稳定剂，抑制核酸酶活性，防止病原体核酸降解影响检测灵敏度。

去污染操作

对呼吸道标本（如痰液）采用二硫苏糖醇（DTT）液化处理，去除黏液干扰；粪便标本需经磷酸盐缓冲液悬浮过滤以剔除颗粒杂质。

样本分装与保存条件

分装体积标准化

按检测项目需求分装至冻存管（如PCR用100μL/管），避免反复冻融，分装后标记二级条形码确保追溯性。

短期保存规范

2-8℃保存的标本需在24小时内处理完毕；-20℃保存适用于72小时内检测的样本，确保冷冻链不间断。

长期冷冻管理

需归档的标本存储于-80℃超低温冰箱，每份标本独立包装并录入库存管理系统，定期核查温度记录与样本完整性。

03

快速检测方法实施

免疫层析技术原理

核酸扩增技术原理

基于抗原-抗体特异性结合反应，通过标记物（如胶体金或荧光微球）显色判定结果，适用于病毒、细菌等病原体的快速筛查。

采用等温扩增或实时荧光PCR技术，通过靶序列扩增实现高灵敏度检测，需匹配特异性引物和探针设计。

检测原理与试剂盒选择

试剂盒性能验证

选择试剂盒时需评估灵敏度、特异性、批间差等参数，确保符合临床检测需求，优先选择通过权威机构认证的产品。

样本类型适配性

根据检测目标（如血液、咽拭子、尿液等）选择对应样本处理流程的试剂盒，避免因样本兼容性导致假阴性结果。

严格遵循样本采集、运输和保存条件（如低温离心、灭活处理），确保病原体核酸或抗原完整性。

使用定量移液器精确加样，设置阴阳性对照和内标，监控检测系统有效性，避免交叉污染。

依据试剂说明书规定的时间窗口判读，使用专业读条仪或肉眼比对色卡，避免主观误差。

定期对离心机、恒温仪等设备进行校准，记录温控和转速参数，确保检测环境稳定。

操作步骤标准化执行

样本前处理规范

加样与反应控制

结果判读标准化

设备校准与维护

异常情况处理预案

复核样本来源及操作记录，排查交叉污染或试剂失效可能，必要时复测或送检参比实验室确认。

假阳性结果处理

启用备用设备或协调其他实验室资源，对中断检测的样本标记并优先复测，确保报告时效性。

设备故障应急措施

检查样本采集质量（如病毒载量不足）、提取效率或扩增抑制物干扰，优化样本处理流程或更换检测方法。

假阴性结果处理

01

03

02

发生样本泄漏时立即启动