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一种新型PCR扩增反应体系的筛选与优化
摘要
一种新型的PCR(聚合酶链式反应)扩增的方法不仅有利于提高扩增的一次成功率,还可以方便下游的开展,提高工作的效率与成功率。GC含量较高的DNA序列在基因组中广泛存在,特别容易形成二级结构干扰PCR扩增,从而难以得到所需目的基因。为解决这个问题,采取了一系列措施如改变变性及退火温度;用NaOH进行DNA模板变性;加入DMSO、甲酰胺、甘油等溶剂破坏碱基配对;加入dGTP类似物以降低熔解温度Tm等。但是上述办法只针对部分GC丰富DNA的扩增有效,还有许多的情况下完全无效。近年研究通过使用不同的添加剂,发现
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