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产KPC-2型碳青霉烯酶奇异变形杆菌的多维度解析与临床启示

一、引言

1.1研究背景

奇异变形杆菌（Proteusmirabilis）作为变形杆菌属的一种主要病原菌，广泛分布于水、土壤、腐败的有机物以及人和动物的肠道之中。它是一种条件致病菌，在机体免疫功能正常时，通常不会引发疾病，但当人体抵抗力下降，如患有慢性疾病、接受免疫抑制剂治疗或存在其他感染等情况时，其致病性便会显现出来，进而导致一系列临床症状。在泌尿系统中，奇异变形杆菌是仅次于大肠埃希菌的主要病原菌，肾结石和膀胱结石的形成也可能与它的感染存在关联。除此之外，它还能引发败血症、食物中毒、腹膜炎、脑膜炎等疾病，严重威胁人类健康。

碳青霉烯类抗菌药物凭借其广谱的抗菌活性和强大的杀菌能力，一直被视为治疗产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）、AmpC酶肠杆菌科细菌感染的最后一道防线。然而，近年来随着碳青霉烯类抗菌药物，如亚胺培南、美罗培南、厄他培南等在临床的不合理使用及滥用，耐碳青霉烯类药物的奇异变形杆菌分离率与感染率持续上升，给临床治疗带来了严峻挑战。

KPC-2型碳青霉烯酶是一种能够高效水解碳青霉烯类抗生素的酶，其基因定位于质粒，这使得它可以借助质粒和转座元件在细菌种属间进行克隆传播和基因水平转移。一旦细菌产生KPC-2型碳青霉烯酶，不仅会对碳青霉烯类药物耐药，还常常引发对多种抗菌药物的协同耐药，导致临床治疗可供选择的药物极为有限。相关研究表明，由产KPC-2型碳青霉烯酶细菌引发的感染往往与患者的高死亡率相关，给临床治疗和患者预后带来极大的负面影响。

1.2研究目的与意义

本研究旨在深入探究产KPC-2型碳青霉烯酶奇异变形杆菌的耐药机制、分子分型、基因环境、传播机制及菌株微进化等特性。通过对这些方面的研究，能够更全面、深入地了解产KPC-2型碳青霉烯酶奇异变形杆菌的生物学特性，为临床治疗提供准确、可靠的理论依据，帮助临床医生更精准地选择治疗方案，提高治疗效果。同时，研究其传播机制有助于制定针对性的防控策略，降低该菌在医院及社区中的传播风险，有效减少感染的发生，对于保障公众健康、提升医疗质量具有重要的现实意义。此外，对该菌的研究还能为耐药菌的监测提供重要的数据支持，为后续的抗菌药物研发和合理使用指明方向，具有深远的科学价值和临床应用前景。

二、产KPC-2型碳青霉烯酶奇异变形杆菌的分离

2.1样本采集

本研究中的实验菌株来源于2016年1月至2017年6月期间，由浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室保存的菌种。这些菌种均采集自临床住院患者的粪便标本，样本采集地点位于该医院内部。采集对象涵盖了不同年龄、性别、基础疾病以及治疗情况的住院患者，旨在全面获取可能携带产KPC-2型碳青霉烯酶奇异变形杆菌的样本，以确保研究结果的代表性和可靠性。在样本采集过程中，严格遵循无菌操作原则，使用无菌采样器具采集适量粪便标本，并及时将其置于合适的保存环境中，以保证细菌的活性和特性不受影响。

2.2分离流程

从耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌中筛选奇异变形杆菌时，首先将保存的粪便标本接种于含碳青霉烯类抗生素的选择性培养基上，在37℃恒温培养箱中进行培养18-24小时。经过培养后，挑取形态、颜色、边缘特征等符合肠杆菌科细菌特点的单个菌落，再次接种于新鲜的选择性培养基上进行纯化培养，以确保获得单一的菌株。对纯化后的菌株，采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）进行初步鉴定。该技术通过将细菌细胞中的蛋白质离子化，根据蛋白质的质量-电荷比形成独特的质谱图，再与数据库中的标准图谱进行比对，从而快速准确地鉴定细菌的种类。如果质谱鉴定结果提示为奇异变形杆菌，便将其挑选出来进行后续研究；若鉴定结果不明确或为其他菌属，则进一步采用16SrRNA基因测序等分子生物学方法进行确证。16SrRNA基因是细菌染色体上编码rRNA相对应的DNA序列，具有高度的保守性和特异性，通过对其进行PCR扩增和测序，并与GenBank数据库中的已知序列进行比对分析，可准确确定细菌的分类地位。

2.3案例分析

在本次研究中，对365株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌进行了筛选。经过在含碳青霉烯类抗生素的选择性培养基上的初次培养，共挑取了500余个疑似菌落。对这些菌落进行纯化培养后，利用MALDI-TOFMS进行初步鉴定，其中有80株初步鉴定为奇异变形杆菌。对这80株疑似奇异变形杆菌，进一步采用16SrRNA基因测序进行确证，最终成功筛选出6株产KPC-2型碳青霉烯酶奇异变形杆菌，分别命名为菌株L44、L49、L52、L71、L76、