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电场赋能柠条种子：干旱胁迫下幼叶基因表达的微观解析

一、引言

1.1研究背景与意义

在农业生产和生态建设领域，如何提高植物的抗逆性、促进其生长发育一直是研究的重点。电场处理种子作为一种物理调控手段，因其操作简便、环境友好等特点，逐渐受到广泛关注。研究表明，电场处理能够对种子的萌发、幼苗生长以及植物的抗逆性产生显著影响，但其生物效应机理尚未完全明确。

柠条（CaraganakorshinskiiKom.）作为一种重要的生态经济型灌木，广泛分布于我国干旱、半干旱地区。它具有耐旱、耐寒、耐瘠薄等特性，在保持水土、防风固沙以及为牲畜提供饲料等方面发挥着重要作用。然而，柠条种子在自然环境中，尤其是干旱胁迫条件下，发芽率和幼苗成活率较低，严重制约了其在生态修复和农业生产中的应用。

因此，开展电场处理柠条种子的研究，对于揭示电场处理种子的生物效应机理具有重要的理论意义。通过探究电场处理对柠条种子在干旱胁迫下幼叶基因表达的影响，有助于从分子层面深入理解电场作用的机制，为进一步完善电场处理种子技术提供理论依据。同时，这一研究也具有重要的实践意义，有望为提高柠条在干旱地区的种植成活率和生长质量提供新的技术手段，促进干旱、半干旱地区的生态环境改善和农业可持续发展。

1.2电场对植物影响研究进展

国内外众多学者对电场影响植物的生长发育和抗逆性进行了广泛研究。在生长发育方面，Kazimierz早在20世纪80年代用静电场精选燕麦种子时，就发现能提高种子的发芽势，缩短发芽时间。国内研究也表明，适宜强度的静电处理可使种子的发芽率、发芽势、根长、芽长、鲜重、简化活力指数等指标均有不同程度的提高，能增加种皮透性，促进种子内部细胞活化，打破休眠状态，加速种子萌发过程中储藏物质的分解、转化和再利用，使幼苗生长旺盛。

在抗逆性方面，有研究发现电场处理能够提高植物对盐胁迫、干旱胁迫等逆境条件的适应能力。如以燕麦为研究对象的实验表明，电场处理能够提高燕麦种子在盐胁迫下的萌发能力，使幼苗的株高、叶面积、根系发育等指标均优于对照组，提高了燕麦幼苗的抗逆性。

关于电场作用于植物的途径和机制，目前主要有以下几种观点。一是电场影响生物的电特性，静电力存在于分子的一切极性和带电集团之间，电场作用在生物膜上，会改变膜上的电荷分布，从而改变生物的电特性。二是电场作用影响膜电位，外电场会诱导膜电位改变，影响细胞的能量转化和物质运输的一切生理过程，提高膜主动吸收、转运营养物质的能力，提高代谢水平。三是电场对膜透性的影响，适宜的高压静电处理可导致种子细胞介质电势增大，离子渗出少，表现为电解质外渗透率降低，膜透性减小，促进膜修复能力的增强。此外，电场还能影响酶活性，对生物体中酶的合成起诱导作用，引起含金属的酶构象发生变化，提前激活酶，如高压静电处理种子可使CAT、POD、SOD等保护酶活性显著提高，增强自由基清除能力，保护生物膜及其它生命物质。

1.3mRNA差异显示技术及其在植物基因研究中的应用

mRNA差异显示技术，全称为差示反转录PCR（DifferentialDisplayofreverseTranscriptionalPCR，简称ddRT-PCR），是将mRNA反转录技术与PCR技术二者相互结合发展起来的一种RNA指纹图谱技术。其基本原理是利用所有真核基因的mRNA的3’端都有一段多聚腺苷酸poly(A)尾结构的特点，将不同来源的总mRNA反转录合成cDNA。此cDNA合成采用oligo(dT)12MN为引物，其中M为A、C、G中的任意一种，N为A、C、G或T中的任意一种，共有12种oligo(dT)12MN引物。M为锚定碱基可增大引物的Tm值，N称为分类碱基，对反转录进行分类。用这12种引物分别对同一总mRNA样品进行cDNA合成，即进行12次不同的反转录反应，得到12种类型的cDNA，从而将总mRNA分为12个亚群。在此基础上对每一类cDNA进行随机引物和相应的反转录引物PCR扩增，由于扩增的cDNA片段被放射性同位素标记，因而利用放射自显影技术通过对不同组织样品的同一类cDNA的PCR选择性扩增产物进行凝胶电泳分析，从而反映出不同样品间基因的时间和空间上的组织特异性表达。

该技术具有诸多优点，如操作相对简便、快速，能够同时对多个样品进行分析，可在短时间内获得大量的基因表达信息，并且可以用于分离和克隆差异表达的基因。然而，它也存在一些不足之处，例如假阳性率较高，由于PCR扩增的随机性，可能会产生一些非特异性的扩增条带，导致结果分析出现误差；此外，该技术分离得到的差异片段通常较短，往往需要进一步的实验来获