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免疫抗体检测操作规程

一、概述

免疫抗体检测是通过体外实验手段，定量或定性分析生物样本中特定抗体的存在与水平，广泛应用于临床诊断、疾病监测、疫苗研发等领域。本规程旨在规范免疫抗体检测的操作流程，确保检测结果的准确性和可靠性。

二、实验准备

（一）试剂与耗材

1.样本采集管：无菌采血管（如EDTA管、肝素管等）。

2.抗体检测试剂盒：根据检测目标选择相应的试剂盒（如ELISA、化学发光法等）。

3.试剂配制：按照试剂盒说明书配制底物、洗涤液、标准品等。

4.其他耗材：移液器吸头、微量离心管、酶标板等。

（二）仪器设备

1.移液器：精确量取微量液体（范围0.1-1000μL）。

2.离心机：样本处理（转速1000-12000r/min，时间5-10分钟）。

3.酶标仪/化学发光检测仪：读取检测结果（检测范围0.01-5.0OD值）。

4.冰箱：样本及试剂保存（温度2-8℃）。

（三）实验环境

1.保持实验室清洁，避免污染。

2.操作台面需用70%酒精擦拭消毒。

3.空气净化系统运行正常，防止交叉污染。

三、操作步骤

（一）样本采集与处理

1.采集静脉血5-10mL，置于无菌采血管中。

2.室温静置30分钟，避免剧烈振荡。

3.3000r/min离心10分钟，分离血清或血浆。

4.将样本转移至干净离心管，-20℃保存备用。

（二）试剂准备

1.检测前30分钟，将试剂盒及样本恢复至室温（20-25℃）。

2.按说明书比例稀释样本，避免气泡混入。

3.配制标准品曲线，设0、1、2、4、8、16μg/mL浓度梯度。

（三）检测操作（以ELISA为例）

1.加样：

(1)96孔板加入标准品及样本（每孔100μL）。

(2)加入酶标抗体（100μL/孔），覆膜37℃孵育60分钟。

2.洗涤：

(1)弃去孔内液体，甩干。

(2)每孔加入洗涤液250μL，静置5秒后弃液。

(3)重复洗涤3次。

3.显色：

(1)加入底物液100μL/孔，避光孵育30分钟。

(2)加入终止液50μL/孔，混匀后酶标仪检测。

4.计算：

(1)用标准品浓度对数作横坐标，OD值作纵坐标绘制曲线。

(2)样本OD值代入曲线方程，计算抗体浓度。

（四）质量控制

1.每批实验设置阴性对照、阳性对照及空白对照。

2.阴性对照无OD值，阳性对照在预期范围内。

3.空白对照OD值≤0.1，否则实验无效。

四、结果分析与保存

（一）结果判读

1.抗体浓度高于阈值，判定为阳性。

2.低于阈值，判定为阴性。

3.临界值附近需重复检测确认。

（二）数据记录

1.记录样本编号、检测日期、操作人。

2.保存原始数据及计算结果（电子版或纸质版）。

（三）样本保存

1.未检测样本需-20℃保存，有效期6个月。

2.废弃样本按生物危害物处理，避免泄漏。

五、注意事项

（一）避免污染

1.操作时佩戴手套，更换吸头。

2.使用无菌移液器吸头，避免交叉污染。

（二）试剂使用

1.试剂开封后需4小时内使用完毕。

2.底物液避免光照，变色后立即终止实验。

（三）仪器校准

1.酶标仪每日校准，确保读数准确。

2.离心机转速定期检测，避免误差。

六、废弃物处理

（一）样本处理

1.使用后的采血管高温高压灭菌（15分钟）。

2.血清样本混入消毒剂后统一处理。

（二）试剂处理

1.底物液、洗涤液倒入指定废液桶。

2.废弃酶标板用70%酒精浸泡后丢弃。

（三）环境消毒

1.实验台面用消毒液擦拭，30分钟后通风。

2.手部接触区域重点消毒，防止外泄。

**一、概述**

免疫抗体检测是通过体外实验手段，定量或定性分析生物样本中特定抗体的存在与水平，广泛应用于临床诊断、疾病监测、疫苗研发等领域。本规程旨在规范免疫抗体检测的操作流程，确保检测结果的准确性和可靠性。主要涵盖样本采集、试剂准备、检测操作、质量控制、结果判读及废弃物处理等环节。熟悉并严格执行本规程，有助于减少操作误差，提高检测效率。

**二、实验准备**

（一）试剂与耗材

1.**样本采集管**：

(1)选择合适的采血管，如含有EDTA抗凝剂的管用于全血样本，或含有肝素抗凝剂的管用于血浆样本，根据检测目的和后续步骤选择。

(2)确保采血管无破损、无污染，批号一致。

(3)配备采血针、止血带、消毒棉签（如70%酒精棉片）。

2.**抗体检测试剂盒**：

(1)根据检测目标抗体（如IgG、IgM、IgA等）选择对应的试剂盒，常见类型包括：

(a)酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒。

(b)化学发光免疫分析法试剂盒。

(c)时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）试剂盒。

(2)检查试剂盒在有效期内，包装完好，无破损或泄漏。

(3)仔细阅读并保存