酶分子改造的方法及应用 - 副本.pdfVIP

酶分子改造的方法及应用

摘要：酶工程是研究酶的生产和应用的一门技术性学科，进入20世纪后，随着微生物发酵

技术的发展和酶分离纯化技术的更新，酶制剂的研究得到不断推进并实现了其商业化生产，

但直接利用酶制剂时存在酶的稳定性差、使用效率低、不能在有机溶剂中反应等缺点。通过

酶的修饰可提高酶的稳定性，消除或降低酶的抗原性，使之更适合生产和应用的要求。近年

来发展的蛋白质工程技术则使酶的定向改造成为可能。随着生物技术的发展，酶工程将引起

巨大的变革。

关键词：酶分子修饰蛋白质工程模拟酶

引言：近年来，酶工程开始兴起，迅速发展，其研究成果也越来越广泛地运用于各个领域。

虽然如此，但是由于酶一离开其特定的环境条件就会变得不太稳定，不适合大批量生产的需

求，因此，大规模应用酶和酶工艺的还不多。在工业应用中，底物及产物带来的影响常常导

致pH偏离酶作用的最适条件的中性范围，使酶难以发挥作用。在临床应用上，绝大多数酶

对人体而言都是外源蛋白质，具有抗原性，直接注入会引起人体的过敏反应。所以人们希望

能够通过各种人工方法改造酶，使其更能适应各方面的需要。

1.酶分子改造的方法

1.1酶分子修饰

酶分子修饰[1]（ModificationofEnzymeMolecule）即通过各种方法使酶分子的结构

发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的过程。酶分子修饰在提高酶的活力、增强酶

的稳定性、降低或消除酶的抗原性、研究各种物理因素对酶分子空间构象的影响，进一步探

讨酶分子的结构与功能之间的关系等方面具有重要意义。

1.1.1酶分子的主链修饰

[2]

酶分子的主链修饰就是利用酶分子主链（肽链或核苷酸链）的切断和连接，使酶分子

的化学结构及其空间结构发生某些改变，从而改变酶的特性和功能的方法。

主链的切断修饰[3]

主链断裂后，引起酶活性中心的破坏，酶的催化功能丧失（用于探测酶活性中心的位置）。

酶活性中心的空间构象维持不变，酶的催化功能也可以保持不变或损失不多，但是抗原性有

发生改变。这样可以提高药用酶的使用价值。主链断裂有利于酶活性中心的形成，可使酶分

子显示其催化功能或使酶活力提高。

主链的连接修饰

将两种或者两种以上的酶通过主链连接在一起，形成一个酶分子具有两种或者多种催化

活性的修饰方法称为酶的主链连接修饰。在一个酶分子上具有两种或多种催化活性的酶称为

多酶融合体。通过基因融合技术将两种或两种以上的酶的基因融合在一起形成融合基因，再

经过克隆和表达，有可能获得各种多酶融合体。

1.1.2酶的侧链基团修饰[4]

采用一定的方法使酶的侧链基团发生改变，从而改变酶分子的特性和功能的修饰方法称

为侧链基团修饰。

其意义在于（1）可以研究各基团在酶分子中的作用，并用于研究酶的活性中心的必需

基团。（2）可以测定某一种基团在酶分子中的数量。（3）可以提高酶的活力、增加酶的稳定

性、降低酶的抗原性，以提高酶的使用价值。（4）可能获得自然界原来不存在的新酶种。例

如，某些抗体酶和人工改造的核酸类酶等。

1.1.3酶的组成单位置换修饰

酶蛋白的基本组成单位是氨基酸，将酶分子肽链上的某一个氨基酸换成另一个氨基酸的

修饰方法，称为氨基酸置换修饰。酶RNA的基本组成单位是核苷酸，将酶分子核苷酸链上的

某一个核苷酸换成另一个核苷酸的修饰方法，称为核苷酸置换修饰。

[5]

通过酶的组成单位置换修饰，可以提高酶活力、增加酶的稳定性或改变酶的催化专一

性，常用的技术为定位突变。

定点突变技术

[6]

定点突变(sitedirectedmutagenesis)是指在DNA序列中的某一特定位点上进行碱

基的改变从而获得突变基因的操作技术。定点突变技术用于酶分子修饰的主要过程如下：(1)

新酶分子结构的设计(2)突变基因碱基序列的确定(3)突变基因的获得：根据欲获得的突变基

因的碱基序列及其需要置换的碱基位置，合成引物，通过PCR技术获得所需基因。

盒式突变技术

1985年Wells[7]提出的一种基因修饰技术——盒式突变，一次可以在一个位点上产生20

种不同氨基酸的突变体。利用定位突变在拟改造的氨基酸密码两侧造成两个原载体和基因上

没有的内切酶切点，用该内切酶消化基因，再用合成的发生不同变化的双链DNA片段替代