微生物种间互作锰氧化机制及对环境中抗生素的降解.pdfVIP

摘要

锰氧化微生物广泛地分布在土壤和海洋中，由其产生的生物锰氧化物因具有

疏松多孔的结构而被应用于吸附重金属，因具有较强的氧化能力而被广泛用于氧

化降解有机污染物。研究已经发现大量细菌、真菌和藻类的单一菌株能产生锰氧化

活性，而近期研究发现了双菌协作锰氧化的现象，揭示了微生物互作在锰氧化中的

重要作用，但是该现象在环境中机制和普遍性还未被证实，限制了利用微生物互作

锰氧化强化污染物降解的工程应用。本文以一株含有锰氧化基因但是单独培养时

不表达的节杆菌为研究对象，从环境中筛选能够触发其产生锰氧化活性的单菌株

（锰氧化协同菌），以此研究双菌互作锰氧化机制和验证环境中微生物互作锰氧化

的普遍性，并进一步考察互作体系在环境中的锰氧化能力，并收集互作产生的锰氧

化物探究其对抗生素的降解能力。

首先探索了节杆菌互作锰氧化关系的普遍性。从11种土壤样品中共分离得到

了12株形状颜色不一的菌落，这些菌落能够与节杆菌发生互作并使其产生锰氧化

活性。经鉴定发现其中8个菌落含大于两种细菌，另外4个鉴定为纯菌菌落并分

别命名为SphingobiumyanoikuyaeZH,LysobactersoliEH,CaulobactersegnisFS和

CaulobacterendophyticusBI。这些从常见土壤中分离的多种属锰氧化协同菌表明，

互作锰氧化现象在环境中具有一定的普遍性。由这四株锰氧化协同菌分别与节杆

菌共培养构成的四种双菌互作体系在pH为7.2，且混合比例为1:1（v/v）时，具有

最佳的锰氧化活性。

进一步探究了四株锰氧化协同菌与节杆菌互作产生锰氧化活性的机制。通过

抑制四种双菌互作体系中蛋白的活性，发现体系中的锰氧化率显著降低。并且各体

系的超氧化物（ROS）产生速率和锰氧化速率的变化趋势呈显著正相关，说明互作

锰氧化过程有锰氧化蛋白和ROS的参与。组合培养实验发现，各锰氧化协同菌的

外泌物和裂解液几乎无法刺激节杆菌产生锰氧化活性，表明节杆菌与锰氧化协同

菌的互作依赖于活的菌体之间的直接接触。互作体系的转录组数据显示，这四株锰

氧化协同菌的鞭毛合成类基因和分泌系统类基因显著上调，物质转运、细菌趋化性

和分泌系统代谢通路得到显著富集，锰氧化协同菌与节杆菌之间存在竞争关系，可

能通过分泌某种物质导致节杆菌产生锰氧化活性。

最后，考察了互作锰氧化现象能否在土壤环境中发生，以及利用互作产生的锰

氧化物降解抗生素的效率。接种到土壤样品培养液中的四种双菌互作体系中只有

EH互作体系的锰氧化能力较差（锰氧化率仅18.07%）外，FS、BI和ZH互作体

系对Mn(Ⅱ)的氧化率分别达到100%、45.22%和74.57%。群落结构分析发现，四

种双菌互作体系接种到土培液的培养初期都具有较高的相对丰度，说明四种双菌

互作体系能够存活在土培液中。通过对比不加Mn(Ⅱ)的双菌体系对照组，发现EH、

FS、BI和ZH互作体系产生的锰氧化物在1h内显著提升了磺胺嘧啶和氧氟沙星

的降解效率，分别是对照组的3.8至9.43倍和8.32至23.74倍，验证了锰氧化物

在抗生素污染控制中的潜在应用价值。

关键词：微生物种间相互作用；锰氧化机制；降解抗生素；普遍性；节杆菌

Abstract

Manganese-oxidizingmicroorganismsarewidelydistributedinsoilsandoceans.

Thebiogenicmanganeseoxidestheyproduce,withtheirlooseandporousstructure,are

appliedforheavymetaladsorption,andduetotheirstrongoxidativecapacity,theyare

alsowidelyusedfortheoxidativedegradationoforganicpollutants.Ithasbeenfound

thatnumeroussinglestrainsfrombacteria,fungi,andalgaecanexhibitmanganese-

oxid