第七章抗原抗体反应.pptVIP

左右二孔抗原浓度相同，沉淀线融合右孔抗原浓度较低，沉淀线细并靠近抗原孔右孔抗原甚微，近抗原孔处只有一弯眉双向：不同抗原浓度对沉淀线特征的影响继续*第29页，共44页，星期日，2025年，2月5日在抗原抗体多种体系中沉淀线的特征(一)在抗原孔内有三种抗原成分，分别与相应抗体形成3条沉淀线。由于反应的特异性，线互不干扰，线的顺序位置决定于抗原的性质二孔内抗原成分性质完全不同，出现沉淀线交叉现象左孔内含二种抗原成分，其中一种与右孔内相同，出现一条融合线继续*第30页，共44页，星期日，2025年，2月5日左右二孔抗原性质相同，但右孔浓度过大，产生抗原抗体复合物逐渐溶解的“假刺”现象在抗原抗体多种体系中沉淀线的特征(二)左右二孔抗原性质大部分相同，沉淀线融合较多左右二孔抗原性质部分相同，出现部分融合现象返*第31页，共44页，星期日，2025年，2月5日抗血清电泳后在胶中间沿电泳方向开一条槽③免疫电泳：是利用蛋白质在凝胶中电泳迁移率不同能被分离开来的特性与免疫扩散结合一起进行分析的方法。继续*第32页，共44页，星期日，2025年，2月5日火箭电泳：单相免疫扩散与电泳结合的一种方法。继续*第33页，共44页，星期日，2025年，2月5日*第1页，共44页，星期日，2025年，2月5日ppt课件制作及讲课原则自愿有兴趣组织方式分组讲选出最好在班上讲内容自选数量15张分别折算123次作业*第2页，共44页，星期日，2025年，2月5日上章小结：一﹑基本概念主要组织相容性复合物等二﹑MHC抗原的结构和功能MHC-IMHC-II结构、功能及两者与肽结合的区别三﹑MHC抗原基因多态性及结构四﹑MHC的检测原理和应用*第3页，共44页，星期日，2025年，2月5日第七章抗原抗体反应及应用一节﹑抗体的制备二节﹑抗原抗体反应三节﹑抗原抗体反应的应用*第4页，共44页，星期日，2025年，2月5日一节﹑抗体的制备一﹑抗血清的制备及抗体纯化二﹑单克隆抗体的制备三﹑抗体工程四﹑催化性抗体五﹑抗体在抗肿瘤治疗中的应用继续*第5页，共44页，星期日，2025年，2月5日一﹑抗血清的制备及抗体纯化1、抗血清的制备抗血清：含有能与相应抗原结合的抗体分子的免疫动物血清。③抗血清的纯化见下图①免疫动物抗原(半抗原需经转化)佐剂乳化免疫动物②抗血清的制备抗血清的效价测定采血获得抗血清*第6页，共44页，星期日，2025年，2月5日抗血清+3倍体积0℃ddH2O,调pH到7.7加50%-20℃酒精至最后质量分数为20%(保持-5℃)上清沉淀(含IgG/IgA/IgM/杂蛋白)悬浮于0.015-0.02mol/L冷NaCl,用0.05mol/L醋酸调pH至5(0℃)上清液沉淀(含IgA/IgM/杂蛋白)用0.5mol/LNaH2PO4调至pH7.4,-20至-30℃95%酒精至最后质量分数为25%，维持在-6℃上清沉淀(IgG)悬浮于ddH2O,用0.05mol/L醋酸调至pH5.1上清液沉淀调pH至5.5,离子强度为0.01—0.0075,加50%冷酒精至最后质量分数为10%(-3℃)沉淀(IgA/IgM)上清通过分子筛将二者分开2、抗体初步纯化*第7页，共44页，星期日，2025年，2月5日抗血清的初步纯化只是多数抗体类别的纯化。上述冷酒精沉淀法是1946年Cohn创立的较好方法。该法得到的只是较粗Ig。硫酸铵盐析法：比较简便，蛋白质变性小，33%饱和硫盐沉淀各类Ig，分离纯度较差。浓盐使IgA形成二聚体，不宜采用。离子交换层析法：通过层析法，才能获得高纯度某一类Ig。*第8页，共44页，星期日，2025年，2月5日3、抗体进一步纯化IgG在血清中含量最高，占75—80%，纯化的方法常用33-50%硫铵盐析和DEAE-纤维素柱层析法。IgG在pH7.5溶液中带正电荷，其它血清蛋白都带负电荷，因此可用阴离子交换剂DEAE-纤维素一次将IgG提纯到很高的纯度。分离纯化IgM常用18%硫铵沉淀，再DEAE-纤维素柱层析，收集洗脱液，再用分子筛分离，获纯化的IgM。获得的纯化Ig，在4℃保存，长期保存需在-20℃以下。*第9页，共44页，星期日，2025年，2月5日问题：血清中的抗体是由多个抗原决