豆科植物抗逆基因的功能验证方法研究.docxVIP

豆科植物抗逆基因的功能验证方法研究

目录

一、文档简述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.1.1豆科植物经济价值概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.1.2豆科植物抗逆性研究的重要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

1.2国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

1.2.1豆科植物抗逆相关基因研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

1.2.2抗逆基因功能验证技术发展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

1.3研究目标与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

1.3.1主要研究目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

1.3.2具体研究内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

1.4技术路线与研究方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

1.4.1总体技术路线．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

1.4.2主要研究方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

二、豆科植物抗逆基因发掘与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

2.1抗逆基因获取途径．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

2.2抗逆基因候选基因筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

2.2.1基于序列特征筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

2.2.2基于表达模式筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

2.2.3基于进化关系筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

2.3抗逆基因功能预测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

2.3.1蛋白质结构域分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

2.3.2信号通路分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

2.3.3互作蛋白预测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

三、豆科植物抗逆基因功能验证技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

3.1生物学功能验证方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

3.1.1过表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46

3.1.2基因沉默技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48

3.1.3基因编辑技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49

3.2基于转基因体系的验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51

3.2.1转基因载体构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53

3.2.2转基因植株获得与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．55

3.2.3转基因植株表型分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．56

3.3基于转录组学分析的验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62

3.3.1RNASeq数据分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．63

3.3.2差异表达基因分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．64

3.3.3信号通路富集分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．66

3.4基于蛋白质组学分析的验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．66

3.4.1蛋白质提取与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．