第二篇 专题八 第15讲 基因工程及其应用-2025版世纪金榜二轮生物收官专项辅导与训练.docxVIP

第15讲基因工程及其应用

考向1基因工程的基本工具与基本操作程序

【通考源·知识奠基】

一、基因工程标记基因的分类和应用

分类:标记基因可分为选择基因和报告基因,二者都可以用来筛选标记目的基因是否成功转化。

1.选择基因:

(1)直接选择:载体上的标记选择基因一般是一些抗生素抗性基因,在受体细胞的培养体系中加入该抗生素,就可以只保留转入载体的受体细胞,原理如图所示:

(2)间接选择:将目的基因插入含有两种抗生素抗性基因的载体时,如果插入某种抗生素抗性基因内部,则会导致该抗生素抗性基因失活。

常用方法——“影印法”筛选含有重组质粒的细胞

①将混合处理后的细菌先放在含氨苄青霉素的培养基上培养,能生长的是含重组质粒的细菌和含自身环化质粒的细菌,如图1、2、3、4、5菌落。

②再利用无菌的绒布影印到含有四环素的培养基上,如图能生长的菌落为2、3、4,则在含四环素培养基上不生长的即为含有目的基因的菌落,如图1、5菌落。

2.报告基因:

(1)报告基因则是指其编码产物能够被快速测定且不依赖于外界压力的一类基因。常用的报告基因有氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、荧光素酶基因(luc)、β-半乳糖苷酶基因(LacZ)等。

(2)常用方法——“蓝白斑”筛选含重组质粒的细胞

大肠杆菌产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal切割成半乳糖和蓝色物质,在经人工插入外源基因后,大肠杆菌的β-半乳糖