红细胞计数实验操作指南.pptxVIP

任务五红细胞计数

一、原理

二、器材与试剂

三、计数方法

四、计算

五、注意事项

六、正常参考值

七、临床意义

一、原理

将一定量的待检血液经一定倍数稀释后（200倍或400倍）滴入计数室，在显微镜下计数，经换算即可求得1mm3血液中的红细胞数，并可依此计算出每升血液中的红细胞数。图2-2所示为常用的血细胞计数板。

二、器材与试剂

1.仪器：血细胞计数板，血盖片，血红蛋白吸管、5ml吸管、小试管、计数器、显微镜、擦镜纸、脱脂棉等。

二、器材与试剂

2.试剂：红细胞稀释液。0.9％氯化钠溶液或赫姆氏液（氯化钠1g，氯化汞0.5g，结晶硫酸钠5g，加蒸馏水溶解并定容至200mL，过滤，再加石炭酸品红溶液2滴，以便与白细胞稀释液区别）。燕馏水、乙醇、乙醚等。

三、计数方法

取清洁、干燥小试管一支，加红细胞稀释液4．0mL（准确地说应该是吸3．99mL或3．98m），而后用沙利氏吸管吸取待检血液至10刻度（10ul）或20刻度（20ul）处，用棉球拭去管壁外血液，将沙利氏吸管插入小试管内稀释液底部，挤出血液，并吸上清液洗2～3次，将血液与稀释液充分混匀。此时血液被稀释400倍或200倍。

1.稀释血液

三、计数方法

先用低倍镜找到红细胞计数区后，首先应检查计数区是否干净，如不干净可用软绸布擦拭计数板和血盖片的表面至洁净为止；然后用吸管吸取（或用小玻璃蘸取）已摇匀稀释血液，使吸管（或玻璃棒）尖端接触血片边缘和计数室交界处，稀释血液即可自然流入并充满计数室。

2.充液

三、计数方法

将显微镜平放在操作台上，首先用低倍镜对好光，由于计数板的透光性较好，故对好光圈后将光圈尽量关小（称为暗视野）；然后取清洁、干燥的计数板和血盖片，将血盖片紧密覆盖于计数板上，并将计数板平置于显微镜载物台上，用低倍镜对准其中的某一个计数室在暗视野下找到红细胞计数区。

3.寻找计数区域

三、计数方法

计数室充液后，应静置1～2min，待红细胞分布均匀并下沉后开始计数。计数红细胞使用高倍镜。计数的方格为红细胞计数室中的四角4个及中央1个方格共5个中方格或计对角线的5个中方格内的红细胞数（即80个小方格）。

4.计数

三、计数方法

为避免重复和遗漏，计数时应按照一定的顺序进行，均应“从左至右，再从右至左”，计数完16个小方格的红细胞数。在计数每个小方格内红细胞时，对压线的细胞计数时应差循“数左不数右，数上不数下”法则，红细胞在高倍镜下呈圆形或蝶形，中央透亮，微黄或浅金黄色。

4.计数

四、计算

红细胞数（个／mm3）＝R×5×10×血液稀释倍数（400或200）

＝R×2000（或R×1000）

红细胞数（个／L）＝R×5×10×血液稀释倍数（400或200）×106

说明：上述计算式中，R为计数5个中方格（80个小方格）内红细胞数（亦即计数的总值）：5为所计数5个中方格面积，为1／5mm2，要换算为1mm2时，应乘以5；10为计数室深度，为0．1mm，要换算lmm时，应乘以10；106为1L＝1×106mm3。

五、注意事项

1.所用的器材应清洁、干燥，符合标准

2.操作台及其显微镜应保持水平，否则计数室内的液体会流向一侧而使计数结果准确。

3、吸取血液和稀释液要准确。如是抗凝血样，吸取血液之前一定要摇匀；吸管外壁血迹要擦拭干净。

五、注意事项

4.由于动物的红细胞数量较多，血样一般做400倍稀释，便于高倍镜下计数。

5.充液前应将稀释液混匀，充液要无气泡，充液后不要再振动计算板。充液后应静置1～2min方可计数。

五、注意事项

6、计数时应严格按照顺序和压线原则进行，并且至少要计5个中方格内的红细胞数，任意两个中方格之间的误差不应超过20个红细胞。

五、注意事项

7.试验完毕，计数板先用蒸馏水冲洗干净，再用绸布轻轻擦干，切不可用粗布擦拭也不能用乙醚、酒精等有机溶剂冲洗。

五、注意事项

8.血红蛋白吸管每次用完后，先在清水中吸吹数次，然后分别在蒸馏水、酒精、乙醚中按顺序吸吹数次，干后备用。

红细胞计数是一项细致工作，一定要按照实验步骤要求仔细进行，同时还可以使用一些技巧，提高结果的准确性和实验效率，如计数时可先用智能手机拍照，再在手机图片上进行放大计数，这样结果即准确有效率，又避免长期使用显微镜造成了视觉疲劳。

六、正常参考值

动物红细胞正常参考值见表

动物种类

平均值±标准差

动物种类

平均值±标准差

黄牛

7.24±1.57

仔猪

6.26±0.84

水牛

5.92±0.98

犬

6.80±1.40

奶牛

5.98±0.87

猫

7.50±2.10

绵羊

8.42±1.2

马

7.93±1.40

山羊

17.20±3.03

鼠

10.5±0.46

猪

5.51±0.35

驴

5.42±0.98

家兔

6.