3.2 基因工程的基本操作程序（第1课时）高二生物（人教版2019选择性必修3）.pptxVIP

第2节基因工程的基本操作程序（第一科时）【本节聚焦】1、基因工程的基本操作程序主要包括哪几个步骤？2、基因工程操作的每一步涉及的技术和方法有哪些？第3章基因工程

学习目标、重难点核心素养1.阐明PCR的原理，说出PCR反应所需的条件和PCR反应的过程。2.简述基因表达载体的组成及构建过程。1.科学思维：结合生产实例，举例说出基因工程的基本操作程序。2.科学探究：针对人类生产和生活的某一需求，尝试提出初步的基因工程构想，完成初步设计。1.教学重点(1)基因工程的基本操作程序。(2)目的基因的筛选与获取方法。(3)基因表达载体的构建及其组成。2.教学难点(1)理解基因表达载体的构建过程。(2)掌握PCR技术及其在基因工程中的应用。

转基因抗虫棉与普通棉花情境导入如何能培育出自身就能抵抗虫害的棉花呢？培育转基因抗虫棉一般需要哪些步骤？

培育转基因抗虫棉的简要过程与载体拼接普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉

（有抗虫特性）导入抗虫基因重组DNA分子1.目的基因的筛选与获取（前提）2.基因表达载体的构建（核心）3.将目的基因导入受体细胞（关键）4.目的基因的检测与鉴定（保证）提取苏云金杆菌情境导入

一、目的基因的筛选与获取(1)概念：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。主要指的是编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子1、目的基因(2)实例：抗逆性基因生产药物基因毒物降解基因工业用酶基因抗虫棉目的基因：Bt抗虫蛋白基因问题1：那么，如何筛选目的基因呢？

苏云金杆菌制成杀虫剂掌握目的基因的功能掌握目的基因的结构防治棉花害虫发现杀虫作用与Bt基因有关掌握Bt基因的序列深入了解Bt基因的表达产物(Bt抗虫蛋白)Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因一、目的基因的筛选与获取2、目的基因的筛选：抗虫原理？当Bt抗虫蛋白被分解为多肽后，多肽与害虫肠上皮细胞的特异性受体结合，导致细胞膜穿孔，最后造成害虫死亡。思考：Bt抗虫蛋白会不会对人畜产生危害？Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体。如何掌握？怎么获得？

3、获取目的基因常用的方法①从生物组织中直接获取②人工合成③从基因文库中获取④利用PCR获取和扩增目的基因基因比较小、核苷酸序列已知通过DNA合成仪用化学方法直接合成基因组文库（某生物全部基因）部分基因文库（主要是cDNA文库）前提：方法：一、目的基因的筛选与获取DNA合成仪

4、从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。基因组文库部分基因文库（包含一种生物的所有基因）（cDNA文库）（包含一种生物的一部分基因）一、目的基因的筛选与获取（1）基因文库概念（2）基因文库类型

基因组DNA限制酶切基因组文库mRNA逆转录得cDNA,酶切cDNA文库拼接质粒，导入细菌中保存为文库一、目的基因的筛选与获取（3）基因组文库的构建

5、利用PCR获取和扩增目的基因苏云金杆菌Bt基因？快速获得大量Bt基因提取PCR由穆里斯等人于1985年发明，为此，穆里斯于1993年获得诺贝尔化学奖。PCR——聚合酶链式反应原理：DNA半保留复制，即在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。一、目的基因的筛选与获取PCR扩增仪思考：DNA是如何复制的呢？

一、目的基因的筛选与获取

DNA复制的条件:原则:③能量：亲代DNA的两条链4种游离的脱氧核苷酸解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶等由细胞代谢提供的ATP①模板：②原料：④酶：碱基互补配对原则从子链的5端向3端延伸方向:特点:边解旋边复制、半保留复制、多起点双向复制体外复制怎么改进体外用高温代替体外需用耐高温的DNA聚合酶子链合成需要引物引物为DNA聚合酶提供了游离的3′端，使DNA聚合酶从3′端延伸子链。(DNA聚合酶不具有从头合成子链的功能)温故知新

引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。3’5’DNA母链13’5’DNA母链23’5’引物13’5’引物2什么是引物？3’5’DNA母链13’5’DNA母链2引物可以是DNA单链，也可以为RNA单链，体内的DNA复制通常以RNA单链为引物体外（PCR）一般以DNA单链为引物用于PCR的引物长度通常为20~30个核苷酸。引物结合在模板链的3’端相关信息P77：一、目的基因的筛选与获取

体内DNA复制参与的组分在DNA复制中的作用PCR中参与的组分解旋酶DNA母链4种脱氧核苷酸DNA聚合酶引物（通常为小的单链RNA）无需解旋酶，用高