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第1页,共37页,星期日,2025年,2月5日第一节放射自显影技术放射自显影技术-是利用放射性核素衰变时发射的射线对乳胶的感光作用,在乳胶底片上现出影像,以显示标本或样品中的放射性物质的分布、定位和定量的方法。分子克隆965图第2页,共37页,星期日,2025年,2月5日放射自显影技术的优缺点:1、?能准确示踪定位。显示形态与功能的定位关系。2、?能在整体平面上同时比较,注入体内后的标记物质在各个脏器内的分布与代谢状态,分析在各脏器中的摄取量,在不同时期的吸收、分布、转运与排泄途径等动态关系。3、?是细胞内物质代谢研究的有力工具。4、缺点是对某一位置上的放射性一般只能相对定量。第3页,共37页,星期日,2025年,2月5日用于放射自显影的感光材料
(是由卤化银和明胶所组成的乳胶)感光材料特点卤素离子与银离子按一定规律、一定距离排列,形成一立方形的晶体点阵。具有理想晶体结构的卤化银晶体对光线和核射线的作用不灵敏。采用不同配方和制作工艺,使卤化银晶体出现晶体缺陷(不是完全规则的六面体立方结晶,而呈如三角形、圆形等)。导致晶体内部的电荷不平衡。电荷不平衡之处对相反的电荷形成陷阱(亦称敏化中心)。陷阱对提高乳胶的灵敏度,起着重要的作用。主要采用的感光材料有:原子核乳胶:原子核乳胶是自显影中较理想的感光材料。它的银盐颗粒直径在0.2—0.5μm,密度大(1013银颗粒/平方厘米),分辨率高。主要用于微观放射自显影。X光片:X光片两面都涂有保护层,防止乳胶层被划伤,其乳胶银颗粒较大,平均直径为2.5—3μm,密度较小(6×109银颗粒/立方厘米)。氚片:氚片银粒的平均直径是1μm,单面没有保护层,因为保护层将吸收90%以上的发射的β粒子。其余性能与X光片类似。第4页,共37页,星期日,2025年,2月5日选择乳胶一般从敏感度和分辨率两方面来考虑。
质量好的乳胶,颗粒细、密度大、敏感度低,则分辨力高。
反之银盐的颗粒愈大,敏感度愈大,分辨力也愈差。第5页,共37页,星期日,2025年,2月5日剂量与曝光:
放射性剂量给予的大小、曝光时间的长短与放射自显影乳胶底片影像效果好坏有很大关系。
在一个实验中如何选取两者的大小,人们在实际实验中有很多经验。如:分不同的时间取片等。
也有人推荐下面公式:
设:L为单位面积上衰变的放射性强度
A0为单位时间上开始曝光时的放射性强度(μCi/cm2)
At为单位时间上终了曝光时的放射性强度(μCi/cm2)
t为曝光时间,T为半衰期
则因为所以第6页,共37页,星期日,2025年,2月5日乳胶感光原理(1)(2)(3)(4)(1)核射线与乳胶作用时,电离产生的电子;(2)电子向敏化中心移动,形成一阴电层;(3)银离子向阴电层聚集,与此同时银离子被还原成银原子;(4)银原子在敏化中心周围集中而形成潜影。这些潜影将在显影过程中起着重要地催化作用。因而也称为“显影中心”。第7页,共37页,星期日,2025年,2月5日注意:
已经建立起来的潜影,在水、氧作用下会消退(这个现象的实质是溴化银晶体中所产生的极少量的银原子又退变成离子返回晶格),而失去原来的催化作用。
所以在“曝光”期间应注意干燥、低温和隔氧。第8页,共37页,星期日,2025年,2月5日显影、停影和定影显影和显影液(显影剂、促进剂、保护剂和抑制剂组成〕停影和停影液定影和定影液(定影液一般包括:定影剂、保护剂、停显剂和坚膜剂)水洗和干燥第9页,共37页,星期日,2025年,2月5日Х光胶片显影液配方水(50℃)(ml)800米图尔(g)2.2无水亚硫酸钠(g)72海得尔(g)8.8无水碳酸钠(g)48溴化钾(g)4加水至总量(ml)1000常用停影液配方是:28%醋酸48ml,加水至1000ml。酸性坚膜定影液的配方溶液一?①海波(硫代硫酸钠)240g②蒸馏水(50℃)500ml?溶液二①蒸馏水(50℃)150ml②无水亚硫酸钠15g③28%醋酸(冰醋酸3份,加水8份)48ml④钾明矾15g加水总量至:1000ml按上面试剂的顺序分别配置溶液一、二,然后把溶液二加到溶液一中,并剧烈搅拌。第10页,共37页,星期日,2025年
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