鸡新城疫抗体检测技术.pptxVIP

《动物防与检疫技术》

吴双

1%鸡红细胞制备、血凝试验

病毒学

国赛竞赛现场实录

国赛比赛现场实录

国赛比赛获奖标准

HA

HI

国赛竞赛具体步骤及其分值

（一）试验器材准备（占总成绩的8%）

按照操作规程进行器材准备，要求器材选择正确、摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。

（二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%）

按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜、配制过程规范、1%鸡红细胞量适宜等。

（三）血凝试验（占总成绩的20%）

按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板1-12孔滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀，倍比稀释后，再次滴加稀释液，再添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，静置感作适当时间后，正确判定抗原的血凝效价。要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果判定正确等。

（四）配制四单位病毒（占总成绩的10%）

根据血凝试验结果，按照操作规程配制四单位病毒。要求稀释倍数计算正确，稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。

（五）血凝抑制试验（占总成绩的20%）

按照操作规程，对20个被检血清进行血凝抑制试验操作，并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取标准阴性血清、标准阳性血清及被检血清的结果，确定抗体滴度，完成报告。要求移液器使用规范、反应板各孔的稀释正确、感作时间得当、对照成立、结果判断正确等。

（六）抗体滴度报告（占总成绩的24%）

按照操作规程，正确判定抗体滴度，完成报告。要求抗体滴度判读正确、报告方式正确、结果误差符合要求、场地整洁等。

本赛项为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）标准，竞赛时间为180分钟。

实训器材

新城疫弱毒疫苗稀释液（或新城疫弱毒病毒液）、生理盐水（或PBS）、1%鸡红细胞悬液；

微量移液器、微量血凝板、微型振荡器、温箱等。

微量移液器

操作流程

1)根据移取液体体积，选择合适量程的移液器

2)设定移液量

3)安装吸头

4)吸液

5)放液

6)卸去吸头

3)

轻轻压下操作按钮至第一停点位置，约1s后继续将按钮向下压至第二停点，此作用是排尽吸头内的溶液。

4)

松开按钮使之返回起点位置。（在tip头离开液面前，不得松开按钮。需要时，可更换吸头继续移液操作。

前进吸液法

1)

将按钮压至第一停点位置。

2)

将吸头浸入液面，不要过深并缓慢松开按钮，待吸头内液面不上升后，将吸头移出液面并斜贴在试剂瓶

壁上淌走多余的液体。

血凝性病毒

红细胞凝集(血凝现象)

HA试验原理动画视频HA原理.mp4

一

1%鸡红细胞悬液的制备

1)采集至少3只SPF成年公鸡或无新城疫和禽流感抗体的未免疫的健康公鸡抗凝血液（仰卧位或侧卧位保定）。

2)用3～4倍的生理盐水（或PBS）洗涤3次以去除血浆和白细胞，每次以2000r/min离心5~10min，最后一次10min。

3)最后取红细胞泥用生理盐水（或PBS）配成1%的红细胞悬液。于4℃保存备用。

鸡的心脏采血3分28秒.mp4

一

1%鸡红细胞悬液的制备

（保留）

二

HA试验操作术式

依据国家标准GB/T16550-2008新城疫诊断技术进行操作。

HA试验操作术式

孔号

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

稀释度

对照

生理盐水

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

新城疫病毒

1

生理盐水

1%红细胞悬液

感作

结果举例

水平观看结果

倾斜观看结果

振荡混匀，20～25℃静置20min左右

+++++++

-----

1024

512

256

128

64

32

16

8

4

2

2048

二

HA试验操作术式

“+”完全凝集红细胞呈伞状均匀分布于孔底

±”部分凝集红细胞下沉情况介于完全凝集和不凝集之间

“-”不凝集红细胞呈明显纽扣状沉于孔底

二

HA试验操作术式

实例

HA：7log2=1HAU

－

＋

±

定义：能使一定量红细胞完全凝集的病毒的最大稀释倍数为该病毒的血凝滴度，或称血凝价(也就是一单位病毒)，常用nlog2表示。

二

HA试验操作术式

HA试验临床应用

鉴定病毒的血凝性及血凝价

鉴定病毒，诊断传染病

免疫监测

三

注意事项

1)微量移液器的正确使用，保证量取液体量准确；