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基于蛋白质组学解析扶正化瘀方抗CCl4小鼠肝纤维化机制及PDCD4的作用探究

一、引言

1.1研究背景与意义

1.1.1肝纤维化的危害及现状

肝纤维化是肝脏对各种慢性损伤的一种修复反应，其特征是细胞外基质（ECM）在肝脏内过度沉积。这种病理过程在全球范围内普遍存在，严重威胁着人类的健康。据统计，全球一般人群中晚期肝纤维化和肝硬化的合并患病率分别为3.3%和1.3%，且呈现上升趋势。在我国，肝纤维化的患者数量也相当庞大，慢性乙肝患者约3500万，加上慢性丙肝、脂肪肝、血吸虫病、免疫性肝病等患者，构成了庞大的肝纤维化潜在人群。肝纤维化若得不到及时有效的治疗，会逐渐发展为肝硬化，进而引发一系列严重的并发症，如门静脉高压、食管静脉曲张破裂出血、腹水、肝性脑病和肝细胞癌等，最终导致患者死亡。肝硬化在国际上疾病死亡病因中占据第六位，而我国83.77%的原发性肝细胞癌都与乙肝病毒感染有关，乙肝病毒携带者肝细胞癌的风险是未感染者的25-37倍。肝纤维化的早期诊断和有效治疗具有重要的临床意义和社会价值。

1.1.2扶正化瘀方治疗肝纤维化的研究进展

扶正化瘀方是一种中药复方，其治疗肝纤维化的研究历史可以追溯到上世纪50年代。已故上海中医药大学中医学家王玉润在从事血吸虫病肝硬化的防治时，注意到中医药的显著疗效，并于1979年获得国家相关课题资助，开启了中医药抗肝纤维化的研究。随后，其博士生刘平接过接力棒，以上海中医药大学肝病研究所为依托，开展了系统性的规模化研究。课题组率先提出肝纤维化“正虚血瘀”的中医病机假说，以“扶正化瘀”为中医治法，采用国际认同的肝组织纤维化分期“金标准”进行检验，经过“复方——单药——复方”、“临床——实验——再临床”的反复求证过程，揭示了扶正化瘀方药抗肝纤维化的作用机理，阐明了其组方原理和物质基础。多项临床试验结果表明，扶正化瘀胶囊对肝纤维化的总有效率为74％，明显逆转率达52％以上，对肝功能改善的总有效率为74.1％，明显优于对照组。该研究不仅在国内得到同行的公认，也引起了国际肝病学界的广泛关注和强烈反响。扶正化瘀方除了对肝纤维化有显著疗效外，对肺、肾等其他脏器的纤维化也有一定的治疗前景，展现出广阔的应用价值。

1.1.3蛋白质组学在肝纤维化研究中的应用

蛋白质组学是后基因组时代的新兴学科，它以蛋白质组为研究对象，对组织、细胞的整体蛋白进行检测，包括蛋白质表达水平、氨基酸序列、翻译后加工和蛋白质的相互作用等，旨在从蛋白质水平上了解细胞各项功能、各种生理生化过程及疾病的病理过程。蛋白质组学的研究技术主要包括样品的制备和蛋白质的分离、蛋白质检测与图像分析、蛋白质鉴定及信息查询等，如多维色谱法、多维电泳技术、生物质谱等。在肝纤维化研究中，蛋白质组学技术具有重要作用。通过蛋白质组学分析，可以全面、系统地研究肝纤维化发生发展过程中蛋白质表达谱的变化，筛选出与肝纤维化相关的差异表达蛋白质，进而深入探讨肝纤维化的发病机制，为寻找新的诊断标志物和治疗靶点提供有力依据。有研究利用蛋白质组学技术对肝纤维化模型大鼠的肝脏组织进行分析，发现了多个与肝纤维化相关的差异表达蛋白，这些蛋白涉及细胞增殖、凋亡、炎症反应、细胞外基质代谢等多个生物学过程，为进一步揭示肝纤维化的分子机制提供了新的线索。

1.1.4PDCD4与肝纤维化的关系

PDCD4（程序性细胞死亡因子4）是一种多功能的蛋白质，最初被认为是一种肿瘤抑制因子，在多种肿瘤中表达降低。近年来的研究发现，PDCD4不仅参与肿瘤的发生发展，还在炎症反应、细胞凋亡等过程中发挥重要作用。在肝纤维化的发生发展过程中，PDCD4也扮演着重要角色。有研究表明，PDCD4在肝纤维化模型小鼠的肝脏组织中表达异常，其表达水平的变化与肝纤维化的程度密切相关。进一步的研究发现，PDCD4可能通过调节细胞外基质的合成和降解、影响肝星状细胞的活化和增殖等途径，参与肝纤维化的发生发展过程。PDCD4基因缺失可显著改善肝纤维化小鼠的肝功能障碍和炎症反应，提示PDCD4可能是肝纤维化治疗的一个潜在靶点。深入研究PDCD4与肝纤维化的关系，对于揭示肝纤维化的发病机制和寻找新的治疗靶点具有重要意义。

1.2研究目的

本研究旨在通过蛋白质组学技术，全面分析扶正化瘀方对CCl4小鼠肝纤维化模型肝脏蛋白质表达谱的影响，筛选出与扶正化瘀方抗肝纤维化作用相关的差异表达蛋白质，并进一步探讨其作用机制。同时，深入研究PDCD4在扶正化瘀方抗肝纤维化过程中的作用及机制，明确PDCD4是否为扶正化瘀方抗肝纤维化的关键靶点，为进一步阐明扶正化瘀方抗肝纤维化的作用机制提供理论依据，为肝纤维化的临床治疗提供新的思路和方法。

二、材料与方法

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