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基因工程制药技术
实验六：目的基因重组质粒的转化
实验原理：
热休克法是进行外源DNA转化的常用方法。其原理是经过42℃短时间的水浴处理，
使细胞热休克，诱导重组质粒进入感受态细提高转化效率。然后在非选择培养基中培养
一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中筛选。如果转化
成功，获得外源质粒的受体菌能够依靠质粒上的抗素抗性基因在选择平板培养基上生长，
没有获得外源质粒的菌体将被抗菌素杀死。
实验器材：旋涡混合器、微量移液取样器、金属浴、恒温摇床、超净工作台、酒精
灯、玻璃涂棒、恒温培养箱、培养皿等。
实验材料：感受态细胞、质粒、LB液体培养基、LB平板培养基、氨苄青霉素、20%IPTG、
2%X-gal。
实验方法：
1、先将恒温水浴的温度调到42℃。
2、从-80℃超低温冰柜中取出1管（100μL）感受态菌、立即插入冰上、冰浴
5-10min，使其融化。
3、加人10μL连接好的质粒混合液（DNA含量不超过100mg），轻轻振荡后放置
冰上30min。
4、轻轻摇匀后插入42℃水浴中90s进行热休克，然后迅速放回冰中，静置
1~2min。
5、在超净工作台中向上述管中加入800μLLB培养基（不含抗生素）轻轻混匀，
然后固定到摇床的弹簧架上37℃振荡45min。
6、在超净工作台中取上述转化混合液150μL，滴到含氨苄青霉素的固体LB
平板培养皿中。用涂布棒轻轻涂布均匀。
7、滴完菌液后再在平板上滴加40μL2%X-gal，7μL20%IPTG，用涂布棒轻轻
涂布均匀。
8、在涂好的培养皿上做上标记，先放置在37℃恒温培养箱中10min直到表面的
液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37℃恒温培养箱培养约18h。
基因工程制药技术
9、观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。挑选白色菌斑进
行筛选和鉴定。
注意：
整个操作过程均应在无菌条件下进行，所用器皿最好是新的，并经高压灭菌处理，
所有的试剂都要灭菌，且注意防止被污染。 此外转化效率与外源DNA的浓度在一定范
围内成正比，但外源DNA的量过多或体积大。转化效率就会降低。一般情况下，DNA溶
液的体积不应超过感受态细胞体积的10%。
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