T_SEEPLA 08-2024 水生态监测环境 DNA荧光定量PCR法.docxVIP

ICS13.020.01CCSZ01

团体标准

T/SEEPLA08—2024

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水生态监测环境DNA荧光定量PCR法

Waterecologicalmonitoring-environmentalDNAquantitativereal-timePCRmethod

2024-11-26发布2024-11-26实施

四川省生态环境政策法制研究会发布

I

T/SEEPLA08—2024

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4试剂 2

5设备和材料 2

6环境DNA荧光定量PCR检测方法 3

7质量控制与质量保证 6

8废弃物处理 7

附录A（资料性）环境DNA采样记录表 8

附录B（规范性）野外质量控制与质量保证 9

附录C（规范性）实验室质量控制与质量保证 10

参考文献 12

II

T/SEEPLA08—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由四川大学提出。

本文件由四川省生态环境政策法制研究会归口。

本文件起草单位：四川大学、南京大学、成都南易生态环境科技有限公司、四川省生态环境监测总站、中国科学院成都生物研究所、四川省环境政策研究与规划院、四川省生态环境科学研究院。

本文件主要起草人：刘敏、杨江华、韩诚、母亚雯、孙晶莹、柳强、陈勇、谢翼飞、陈明扬、王维、常明庆、刘思瑶、王志浩、杜壮、于苗、张璐、刁剑、谢义琴。

T/SEEPLA08—2024

1

水生态监测环境DNA荧光定量PCR法

1范围

本文件规定了利用环境DNA荧光定量PCR技术监测淡水生物的试剂、设备和材料、检测方法、质量控制与质量保证、废弃物处理的技术要求。

本文件适用于水生态监测中的淡水生生物类群或物种监测，包括浮游植物、着生藻类、水生维管束植物、浮游动物、大型底栖无脊椎动物和鱼类等。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T19495.5转基因产品检测实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测方法

HJ494水质采样技术指导

HJ710.8生物多样性观测技术导则淡水底栖大型无脊椎动物

HJ1295水生态监测技术指南河流水生生物监测与评价（试行）

HJ1296水生态监测技术指南湖泊和水库水生生物监测与评价（试行）

SC/T9402淡水浮游生物调查技术规范

SN/T4278国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程

SN/T4835实验室生物废弃物管理要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

荧光定量PCRquantitativereal-timepolymerasechainreaction

在聚合酶链式反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，并通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

[来源：GB/T19495.5—2018，3.1.3，有修改]3.2

环境DNAenvironmentalDNA；eDNA

环境介质（水、土壤、沉积物、生物膜、空气等）或混合生物组织中存在的生物遗传物质（DNA）。

3.3

Ct值cyclethreshold

每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

[来源：GB/T19495.5—2018，3.1.5]

3.4

阴性对照negativecontrol

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2

在实验过程中，与受试样品平行进行的，用确定不含DNA的样品代替受试样品进行的对照反应，用于观察整个反应体系是否正确，确认没有受到污染。

[来源：SN/T4278—2015，3.7，有修改]

3.5

阳性对照positivecontrol

在实验过程中，与受试样品平行进行的，且预期产生已知阳性结果的样本，用于观察整个反应体系和反应过程是否正常，确认没有受到污染。

[来源：SN/T4278—2015，3.6