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实验动物学细胞培养操作规定

一、总则

细胞培养是实验动物学研究的重要技术手段，为确保实验结果的准确性和可重复性，必须严格遵守规范的操作流程。本规定旨在明确细胞培养的基本原则、操作步骤、质量控制及安全防护要求，适用于所有涉及细胞培养的实验操作人员。

二、实验室准备与设备要求

（一）实验室环境

1.实验室应位于安静、洁净的环境中，避免强光直射和振动干扰。

2.空气洁净度应达到ISO5级标准，空气流速为30-50L/min，温湿度控制在22±2℃、50±10%。

3.实验台面需使用防腐蚀、易清洁的材料，定期消毒（如使用70%乙醇或0.1%次氯酸钠溶液）。

（二）设备要求

1.超净工作台：需定期检测紫外灯强度（≥30μW/cm2）和风速，使用前用70%乙醇擦拭台面。

2.CO?培养箱：温度控制在37±0.5℃，CO?浓度维持在5±0.5%，定期校准pH值（使用pH7.0缓冲液）。

3.生物安全柜：操作前需进行泄漏测试，使用后用70%乙醇喷洒表面并关闭紫外灯30分钟。

三、细胞培养基本操作流程

（一）细胞准备

1.培养基配制：

(1)基础培养基（如DMEM/F12）：添加10%胎牛血清（FBS）、1%双抗（penicillin/streptomycin）、1%L-谷氨酰胺。

(2)根据需求添加细胞因子（如EGF、FGF），浓度参考说明书（通常10-100ng/mL